产品概述：
产品货号及规格
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货号 |
产品名称 |
规格 |
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C6019S |
YF® 488 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（绿色荧光） |
5T |
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C6019M |
20T |
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C6019L |
50T |
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C6020S |
YF® 555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（橙红色荧光） |
5T |
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C6020M |
20T |
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C6020L |
50T |
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C6021S |
YF® 594 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（红色荧光） |
5T |
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C6021M |
20T |
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C6021L |
50T |
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C6022S |
YF® 647A Click-iT EdU 流式检测试剂盒（远红荧光） |
5T |
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C6022M |
20T |
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C6022L |
50T |
产品内容
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规格 组分 |
5T |
20T |
50T |
开封后保存温度 |
稳定性 |
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A. 10 mM EdU |
100 µL |
0.4 mL |
1 mL |
-20℃ |
开封后按指定温度保存可有效放置一年 |
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B. YF® 488/555/594/647A Azide |
25 µL |
100 µL |
250 µL |
-20℃，避光 |
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C. 10× Click-iT EdU反应缓冲液 |
500 µL |
2×1 mL |
5 mL |
2-8℃ |
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D. CuSO4 |
200 µL |
0.8 mL |
2× 1 mL |
2-8℃ |
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E. Click-iT EdU缓冲液添加物 |
15 mg |
60 mg |
150 mg |
2-8℃ |
规格：上述反应次数针对6孔板培养的细胞，不同容器的具体用量可参考附表1。
荧光光谱数据：YF® 488 Azide：495/519 nm；YF® 555 Azide：555/565 nm；
YF®594 Azide：590/617 nm；YF® 647A Azide：650/670 nm.
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。
产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种嘧啶类似物，在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应，形成共价键。
本试剂盒中，EdU含有炔烃，YF® 488/555/594/647A Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。BrdU方法需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用DNase消化）暴露出BrdU，方便BrdU抗体结合；而EdU法只需多聚甲醛固定和Triton X-100促渗就可以使检测试剂进入细胞, 只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于体外培养细胞的增殖检测。
注意事项：
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，实验操作时请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3. Click-iT EdU缓冲液添加物溶液最好现配现用，以保证最佳结果。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书：
常见问题解答：
◆YF®488/555/594/647有什么区别？
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同，可根据偏好或需求进行选择。
◆EdU试剂盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？
清洗步骤中，BSA可以终止掉未反应的甲醛。
◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测？
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗？检测顺序是什么？
本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，故染色后无法直接检测GFP，建议使用GFP抗体间接检测。
◆观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应，验证Click反应信号的特异性。
◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？
1.请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
2.为确保Click反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；
3.由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；
4.当铜离子在合适的化合价时，Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为一价铜(Cu+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。
◆如何对细胞核进行复染？
试剂盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色，也可选择使用DAPI。
◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?
可以。EdU是小分子，可以穿透植物细胞的细胞壁。
使用本产品的文献：
1.Silica-induced macrophage pyroptosis propels pulmonary fibrosis throughcoordinated activation of relaxin and osteoclast differentiation signaling toreprogram fibroblasts
Jiaqi Tian, Dandan Song, Yanjie Peng, Jing Zhang, Lan Ma, Zhen Chen Liyang Liang Zitong Zhang, Xiang Yun , Lin Zhang
Ecotoxicology and Environmental Safety
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