产品概述:
产品规格
10 gels, 125 gels
储存条件
A-D组分4℃保存,E组分-20℃保存,有效期见外包装
产品组分
组分 |
规格 |
|
10 gels |
125 gels |
|
A. 上层胶溶液(2×) |
8 mL |
80 mL |
B. 彩色上层胶缓冲液(2×) |
8 mL |
80 mL |
C. 12.5%下层胶溶液(2×) |
30 mL |
250 mL |
D. 下层胶缓冲液(2×) |
30 mL |
250 mL |
E. 改良型促凝剂 |
1 mL |
8 mL |
产品介绍
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(12.5%)采用预混液形式的配方,制胶时只需加入改良型促凝剂即可,方便快捷。上层胶为彩色(红色)凝胶,便于点样。本产品制备的凝胶也可用于非变性PAGE胶电泳实验。
本试剂盒配备改良型促凝剂,无TEMED刺激性气味,稳定性好、催化效果佳,制备一块或多块凝胶仅需二十分钟左右。为方便取用,已开盖的改良型促凝剂可置于4℃保存至少3个月。
制胶数量(125 gels):125块(0.75 mm);>90块(1.00 mm);>60块(1.50 mm)
实验步骤
1. 根据需要制备的凝胶厚度,取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液,混匀;加入相应体积的改良型促凝剂,混匀。
2. 立即将配制好的下层胶注入玻璃板内,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可,加入适量水或无水乙醇液封,待下层胶凝固,约10-15 min(当液封溶液和胶之间可见明显分界线时,说明胶已凝固),倒去上层溶液。
注:1)溶液配制体积是过量的,可留少许于管中,便于观察凝胶状态;
2)室温较低时,凝固速度较慢,需适当延长凝胶时间。
3. 根据需要制备的凝胶厚度,取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液,混匀;加入相应体积的改良型促凝剂,混匀。
4. 立即将配制好的上层胶注入玻璃板中,插入梳子,待上层胶凝固(5-10 min)拔出梳子。
凝胶配制如下
下层胶配制 |
上层胶配制 |
||||||
凝胶厚度 |
12.5%下层胶 溶液(2×) |
下层胶缓 冲液(2×) |
改良型 促凝剂 |
凝胶厚度 |
上层胶溶 液(2×) |
彩色上层胶缓冲液(2×) |
改良型 促凝剂 |
0.75 mm |
2.0 mL |
2.0 mL |
40 μL |
0.75 mm |
0.5 mL |
0.5 mL |
10 μL |
1.00 mm |
2.7 mL |
2.7 mL |
60 μL |
1.00 mm |
0.75 mL |
0.75 mL |
15 μL |
1.50 mm |
4.0 mL |
4.0 mL |
80 μL |
1.50 mm |
1.0 mL |
1.0 mL |
20 μL |
注:1)尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液;
2)推荐电泳条件:150V,约50 min 或200 V,约35 min。
注意事项
1. 本产品制备的上层凝胶对样品没有浓缩效应,类似于预制胶,与传统PAGE胶相比,蛋白条带分离效果更好,小分子蛋白(比如10 kDa)也可以清晰地分离开,且蛋白条带更窄更锐利。
2. 改良型促凝剂的用量可根据个人习惯和经验调整,加入较多的促凝剂可以加速凝胶,反之亦然。同等条件下,温度越高,凝胶速度越快,温度过高时建议适当降低促凝剂的使用量。
3. 使用前胶溶液及缓冲液恢复至室温,可有效避免凝胶过程中气泡的产生。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
凝胶浓度选择参考
图为 Tris-Glycine 缓冲系统中,彩色预染蛋白Marker (10-250 kDa,三色) (货号:P6222) 在不同浓度彩色快速凝胶中的分离示意图。注:因温度、pH值等因素不同,实际分离情况可能会略有出入,本图仅供参考。例如在 12.5%的下层胶中,10 kDa 蛋白条带有时会分离不出来。
使用本产品的文献:
Ying Chen, Xi Zhao, Yu Men, Kai Yan, Zibin Li, Wenxiu Cai, Yan He, Jie Qi