FAQ

问：如何提高抗体与磁珠结合效率?

答：磁珠与抗体的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关，请确认抗体的类型与Protein A/G配基的亲和效率（附表1）。如抗体所属亚型与Protein A/G的亲和度较低，可以通过增加抗体与磁珠的孵育时间（30~120 min）、提高结合缓冲液的 pH值（8~9）及降低离子强度（25~100 mM NaCl）等方法提高亲和效率。

问：如何提高磁珠在免疫沉淀反应中的特异性?

答：可以先将抗体与样品进行孵育，形成抗体-抗原复合物，再用Protein A/G磁珠捕获复合物。这种方法可以提高抗体与抗原的结合效率，并降低磁珠与样品接触的时间，从而提高沉淀产物的特异性。对于蛋白质/核酸共沉淀或染色质免疫共沉淀也推荐使用此法。

问：如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况？

答：磁珠应保存在2~8℃，使用时应避免由于污染而导致的不可逆聚集，或因干燥而导致的聚集。磁珠在低pH的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加终浓度为0.1%（v/v）的非离子型去垢剂（如NP-40、Tween-20或Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。经过低pH洗脱操作的 磁珠可以用结合缓冲液洗涤至中性，然后用含有0.1%（v/v）Tween-20的Tris buffer（pH7.5）振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理2 min，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。

问：如何解决磁珠易粘附管壁的现象？

答：建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。另外，在缓冲液中添加 0.01%～0.1%（v/v）的非离子型去垢剂 （如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可以有效降低磁珠对耗材的粘附）。

问：磁珠在使用过程中出现结块现象？

答：磁珠在使用时如果出现结块现象一般较难振荡打散，容易导致分布不均，出现该问题的原因是磁珠在磁场中放置太久而使磁珠牢固的结合在一起。用超声波水浴处理2 min即可打散磁珠使其重新分散，但应注意超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。

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