彩色预染蛋白Marker(8-250 kDa,三色)

产品货号: P6223S/P6223M/P6223L
应用范围: 蛋白 Marker
产品规格: 25 µL 2 × 250 µL 10 × 250 µL
价 格 :
135
数  量:
- +
  • 说  明  书: P6223S/P6223M/P6223L

产品介绍

产品货号:P6223S, P6223M, P6223L

产品规格:25 µL,2×250 µL,10×250 µL

储存条件:-20℃保存,有效期见外包装

产品介绍

彩色预染蛋白Marker(8-250 kDa,三色)是一种包含三种颜色预染型蛋白的混合物。产品由11种不同分子量大小的高纯度重组蛋白预混制备而成,涵盖8-250 kDa的分子量范围(8,17,25,33,43,55,72,100,130,180,250 kDa),其中8 kDa是绿色条带,72 kDa是橙色条带,其余9种蛋白为蓝色条带(见图一)。本产品作为Western Blot或SDS-PAGE的蛋白分子量标准品,用于指示SDS-PAGE的电泳蛋白分离情况,亦用于评估Western Blot的转膜效果。本产品在不同胶浓度以及不同的电泳缓冲液中迁移情况见图二。产品已预混loading buffer,不需要加热、稀释或添加还原剂,即可直接点样至蛋白凝胶孔内。我司同样提供其他各种类型的彩色预染蛋白Marker供客户自由选择,详见附表一。

图一. 本产品在12.5%浓度下Tris-Glycine电泳和转印效果 图二. 本产品在不同胶浓度以及在同的电泳缓冲液中迁移情况

产品组成

缓冲液成分:62.5 mM Tris-H3PO4 (pH 7.5),2 mM EDTA,2% (W/V) SDS,33% (W/V) Glycerol,10 mM DTT。

使用方法

1. 从储存冰箱中取出产品,置于室温下进行解冻并轻柔混匀。无需加热煮沸。

2. 直接吸取适宜体积的产品点样至蛋白凝胶的相应孔内。推荐点样量如下:

0.75-1.0 mm厚度:8 μL(15孔),10 μL(10孔);

1.5 mm厚度:10 μL(15孔),12 μL(10孔);

注:可以根据实验情况进行适当调整点样量。

1. 使用完毕后,拧紧管盖,放回冰箱进行保存。短期使用,可以在4℃冰箱保存2个月。长期保存置于-20℃冰箱。

注意事项

1. 产品请勿加热煮沸。

2. 本产品不含蛋白质his标签。

3. 本产品含有SDS,不适合用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

4. 在不同的凝胶缓冲体系中,预染蛋白质的迁移率会有所差别。

5. 在低浓度凝胶中,低分子量条带会与溴酚蓝染料指示条带迁移速度接近而无法分离。可以先在该缓冲体系中用非预染蛋白分子量标准进行标定,可以大致确定蛋白质的分子量。

6. 一般电泳运行至溴酚蓝指示条带基本上到达凝胶底部或预染分子量标准分离展开时即可结束电泳。

7. 由于银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高10倍以上,使用本产品用于银染试验时适当减少产品的使用量。

8. 该产品适用的Western Blot印迹膜材质包括聚偏二氟乙烯(PVDF)、尼龙(Nylon)和硝酸纤维素(NC)。

9. 当转印分子量大于100 kDa的蛋白时,适当延长转印时间或提高电流(恒流电转)/电压(恒压电转),可以提高大分子量条带的转印效果。若仍不能有较好的转印效果,可以适当减少电转缓冲液的甲醇使用量并加入不高于0.02-0.04%的SDS。

附表一. 彩色预染蛋白Marker产品选择指南

产品货号 产品名称 蛋白分子量分布(kDa 条带数量 条带颜色 类型
P6220 彩色预制蛋白Marker(25-400 kDa,四色) 25绿/45/72/100/130/160/200/250/300/400 10 绿/// 高分子量
P6221 彩色预染蛋白Marker(25-300 kDa,三色) 25绿/45/72/100/130/160/200/250/300 9 绿// 高分子量
P8028 彩色预染蛋白Marker(10-250kDa,双色) 10/15/20/25 /35/40/50/70/100/150/250 11 / 宽范围
P6222 彩色预染蛋白Marker(10-250 kDa,三色) 10/15/20/25绿/35/40/50/70/100/150/250 11 绿// 宽范围
P6223 彩色预染蛋白Marker(8-250 kDa,三色) 8绿/17/25/33/43/55/72/100/130/180/250 11 绿// 宽范围
P6110 彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色) 10绿/17/25/33/43/55/70/95/130/180 10 绿// 宽范围
P6224 彩色预染蛋白Marker(2.7-40 kDa,三色) 2.7/4.2/6.5/10绿/15/20/25/30/40 9 绿// 小分子量

FAQ

问:条带为什么和其他厂家的Marker指示条带不一致?是不是不准?
答:(1)我们的蛋白Marker条带大小均是通过非预染Marker进行标定的。 (2)不同厂家的Marker相同大小条带存在差异是正常现象,获得的目的条带的方式可能造成此影响。 (3)我们内部测试过不同厂家的Marker,相同凝胶浓度跑胶条带分离情况类似,条带大小差异不大。

问:条带分不开是什么原因造成的?该怎么解决?
答:(1)请注意选择合适的凝胶浓度,每个浓度的凝胶是有最佳的分离范围的。 (2)请注意跑胶的时间。跑胶时间过长,可能导致小条带出现重叠在一起;跑胶时间过短,条带还没完全分开。 (3)请注意上样量,上样量过大,不同大小条带条带过粗,分离可能不清,建议按照说明书推荐上样量。 (4)请注意闭合电路的完整。确定胶板胶条移除;确定电泳液最终液面到上样孔以上;确定胶板放置正确;确定电泳槽不要漏液。 (5)请注意使用新鲜电泳液。

问:在跑胶时,蛋白条带清晰,颜色明亮,但转膜后发现条带变淡,抗体剥离液越清洗条带越淡是什么原因?该怎么解决?
答:(1)转膜不完全。凝胶上还有残留蛋白,导致没有完全转膜。建议延长转膜时间。 (2)转膜时间过长。转膜时间过长,导致蛋白条带穿过PVDF膜,转到了滤纸上。请缩短转膜时间。 (3)转膜“三明治”结构不紧密,夹子过松,导致转膜闭合电路接触不良,蛋白条带到转膜液中或者没有转上。建议重新换一个夹子。 (4)抗体剥离液可能会影响蛋白Marker条带的亮度,建议在范围内多上些Marker。

问:ECL显影发现个别的蛋白Marker条带也被显影出来是什么原因?该怎么解决?
答:(1)请选用特异性好的一抗。可能是非特异标记。 (2)一抗识别的抗原决定簇是十几个氨基酸序列,可能是蛋白Marker的氨基酸序列是具有相似的结构,所以可能会被标记上。 (3)请降低一抗的稀释浓度。降低非特异性标记的可能。

问:条带模糊是什么原因造成的?
答:(1)蛋白上样量过少或者过多都可能导致条带模糊。 (2)电压过高或电泳时间过长,产热过多导致电泳缓冲液温度升高。 (3)电泳缓冲液陈旧,pH值不在缓冲范围内。 (4)存储或取用不当,导致蛋白降解。

问:蛋白条带消失是什么原因造成的?
答:(1)保存不当导致的蛋白条带降解。 (2)电压不稳,可能也会导致蛋白条带消失。

已发表文献

P6223S/P6223M/P6223L

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彩色预染蛋白Marker(8-250 kDa,三色)