产品介绍

产品货号：F3013S，F3013L

储运条件

-20℃避光保存，有效期见外包装；冰袋运输。

产品特点

荧光亮度强：发光时间久，不易淬灭；

选择方便：可搭配我司其它试剂使用，方便灵活。

产品组别

产品参数

外观：可溶于DMSO的橙红色粉末

Ex/Em：494/516 nm（结合Ca2＋后）

CAS号：273221-67-3

分子式：C51H50F2N2O23

分子量：1097.0

分子结构图：

光谱图：

注意事项

1. 如果使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM ester体，从而降低Fluo-4，AM ester进入细胞的效果。另外，含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，加工作液前应尽量去除残留培养基。荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光。

2. Fluo-4，AM ester容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后开封。由于试剂极微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3. Fluo-4，AM ester遇水极易分解，如果不能一次用完，建议将储液小量分装保存。

4. 本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法

1. 用无水DMSO溶解Fluo-4, AM ester，配制成2 mM的储液（将1 mg Fluo-4, AM ester溶于456 µL无水DMSO中）。

2.用PBS或HBSS稀释Fluo-4, AM ester储液，制备4 μM的Fluo-4, AM ester工作液。

注：推荐工作液浓度为4~20 μM。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用最低探针浓度，可从4 μM开始摸索。

3.（可选）如果Fluo-4, AM ester进入细胞的效果不好，可向Fluo-4, AM ester溶液中加入适量20% Pluronic F-127溶液，防止Fluo-4, AM ester在缓冲液中聚集并促进Fluo-4, AM ester进入细胞，Pluronic F-127终浓度控制在0.04~0.05%。

注：(1)20% (w/v)的Pluronic F-127 DMSO母液配制：100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO，配制成20% (w/v)的DMSO母液。溶解需要在40~50℃加热20~30 min。溶解后室温保存，勿冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

(2)Pluronic F-127可降低Fluo-4, AM ester的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储液中。

4. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用PBS或HBSS溶液洗涤细胞3次。

5. 去除缓冲液，将Fluo-4, AM ester工作液加入细胞中，在37℃培养10~60 min。

注：如果首次实验不能确定孵育温度和时间，建议尝试37℃孵育20 min，观察荧光效果。若细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。

6. 去除Fluo-4, AM ester工作液，用PBS或HBSS等缓冲液洗涤细胞3次，然后用PBS或HBSS等缓冲液重悬细胞，制成1×105 cells/mL细胞悬液。

7. 37℃培养10 min，确保AM体在细胞内的完全去酯化作用。

8. 进行荧光钙离子检测。

注：钙浓度与荧光的关系式为：[Ca2+] = Kd [(F - Fmin) / (Fmax - F)]

F是实验钙浓度下指示剂的荧光，Fmin是无钙时的荧光。Fmax为饱和钙浓度下指示剂的荧光。

据报道，Fluo-4在无细胞介质中的Kd为345 nM，然而，Kd通常会受到细胞中多种因素的影响，包括pH值、蛋白质浓度、离子强度、温度和粘度。因此，要准确测量细胞内的钙浓度，必须校准Kd。详细信息，请参阅参考文献。

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