产品介绍

产品货号：S6011S, S6011M, S6011L

产品规格：S, M, L

Super-n-stain® Antibody Labeling Kits（抗体标记试剂盒）

产品内容：

染料信息

储存条件

-20℃保存，有效期见外包装。

产品介绍

Super-n-stain® 抗体标记试剂盒包含您需要的利用本公司YF 染料或生物素（Biotin）迅速标记抗体的所有组分。标记过程只需将抗体和染料简单混合于试剂盒内提供的反应缓冲溶液中，进行短时间的孵育即可。Super-n-stain® 染料在标记结束时不再反应，因此无需进一步纯化步骤。标记后，约4-6分子染料与1分子抗体共价结合。Super-n-stain®是共价标记，所以用它标记的抗体可以用于多色荧光染色，而不会发生抗体间的染料转移现象。

Super-n-stain® 标记可以兼容NaN3、低浓度的甘油、Tris和甘氨酸。试剂盒里提供的微型超滤离心管可以在标记前快速去除不兼容的小分子抗体稳定剂。

标准Super-n-stain® 标记步骤可以用于多于IgG (μg) 4倍的BSA或明胶样品。根据您希望标记的IgG量来选择试剂盒大小。优化标记步骤适用于稳定蛋白质过剩或腹水的IgG样品。在这种情况下，根据需要标记抗体样本的蛋白质总量（IgG + 稳定剂，或腹水中总蛋白量）来选择试剂盒大小。优化步骤也可用于标记IgG量低于最低范围的样品，通过添加稳定剂蛋白使总蛋白量达到试剂盒的标记范围。优化步骤不建议用于标记天然抗血清或杂交瘤细胞株培养上清，因为这些样本的抗体含量相对于总蛋白非常低。

当用荧光标记抗体直接进行免疫荧光时，您可能需要使用更高浓度的抗体来实现类似间接免疫荧光法检测（一抗加标记二抗）染色的强度。在我们的内部测试中发现，间接免疫荧光染色结果是直接免疫荧光染色信号的三倍左右。

标记二抗仍可以连接到使用Super-n-stain® 试剂盒标记的一抗上，因此如果多个来自同一物种的抗体用于多色免疫荧光染色法，二抗无法区分同一物种来源的未标记的一抗和使用Super-n-stain® 试剂盒标记的一抗。Super-n-stain®标记抗体可以用作传统间接免疫荧光法检测后的三级染色。UElandy 还提供生物素Super-n-stain® 标记试剂盒、二次检测使用的YF 染料标记的链霉亲和素或YF染料标记的单克隆生物素抗体。

我们还提供酶标记和荧光蛋白标记的 Super-n-stain®试剂盒，以及小配体标记试剂盒（请访问www.uelandy.com）。更多信息，请参见常见问题。

准备工作

Super-n-stain® 抗体标记试剂盒适合标记IgG。我们不建议标记其他蛋白质，因为标记的DOL（degree of labeling）可能达不到较好值。Super-n-stain® 标记条件可能导致IgM抗体变性。

检查你的抗体与抗体兼容性指南。如果你的一抗是商业产品，请联系供应商以获取抗体浓度和配方。Super-n-stain® 标记不能用于标记天然抗血清或杂交瘤细胞株培养上清液。使用蛋白质纯化步骤或商业化抗体纯化试剂盒，如Pierce Antibody Clean-Up Kit纯化IgG。

不含稳定剂的抗体溶液可以得到较好的标记结果，而标准的标记步骤可以兼容低浓度的BSA、明胶、Tris和甘油，标记液不受NaN3的影响。对于标准的标记步骤（B），根据需要标记的IgG的ug数量选择试剂盒的规格。

Super-n-stain® 的优化步骤（C）是基于标记蛋白质总量而不是IgG标记量来设计的。优化步骤应用于含有过多稳定蛋白质的抗体标记，溶液中的抗体标记也适用于优化步骤，但您必须在标记前确定溶液中总蛋白的浓度（通过测量280 nm吸光度估计蛋白质浓度）。试剂盒规格的选择根据您标记抗体样本的总蛋白量来确定。优化步骤也可用于标记IgG量低于试剂盒最低范围的样品，通过添加稳定剂蛋白使总蛋白量在试剂盒的标记范围之内。

含有低浓度BSA和明胶的标记抗体可能染色背景略强于不含这些稳定剂的抗体。如果抗体标记在含有BSA或明胶存在的情况下进行，使用包含1% BSA或明胶的阻断和清洗剂将大大降低染色背景。

去除非蛋白成分如Tris、甘氨酸或甘油，可以用试剂盒中提供的超滤管来纯化您的抗体，步骤如下（A）。

标记效率较高的抗体浓度为0.5-1 mg/mL。超滤管可用于浓缩抗体（注意：稳定蛋白质也将集中于超滤瓶）。为定量未知浓度的抗体，UElandy提供WonderOrange™ 蛋白质定量试剂盒（W6006），一种高度敏感性的蛋白质荧光定量测定试剂盒。如果不需要去除或浓缩抗体，则按照标准步骤（B）或优化步骤（C）进行实验。

表1. Super-n-stain® 抗体兼容性和标记步骤选择指南

A. 超滤步骤

重要：在您开始之前，对照表1（Super-n-stain® 抗体兼容性和标记步骤选择指南）确定您的抗体在标记前是否需要超滤。如果有必要，联系抗体厂家了解IgG和抗体稳定剂的浓度。如果您的抗体不需要超滤，根据表1选择合适的标记步骤。超滤膜截留的分子量为10万，因此，小于10 kDa将可以通过膜，和分子大于10 kDa的，包括IgG，将保留在膜上（图1）。注意不要用吸管触碰膜，这会撕裂或穿刺膜，导致抗体损失。超滤管性能最大样本体积：500 μL最终浓缩体积：15 μL

滤液接收器体积：500 μL滞留体积（膜/支持）：< 5 μL1. 添加适量的抗体至超滤管膜中，小心不要触碰膜。

14000 g微型离心机离心1 min，检查有多少液体过滤至滤液收集管（下方）。重复以上操作直到所有液体全部收集到过滤收集管。去除收集管中的液体。2. 对于浓缩抗体，进行第3步。对于纯化，加入等体积1×PBS至超滤管膜中。14000 g微型离心机离心直至液体过滤进入滤液接收管。3. 添加适当体积的PBS至超滤管膜使得最终的抗体浓度为0.5-1 mg/mL，在膜表面小心上下抽吸PBS以重悬抗体。4. 转移回收的抗体溶液至新离心管中。5. 如果您使用优化标记步骤，保存超滤管来浓缩您标记后的抗体。

图1. 超滤管组成

B. 标准的Super-n-stain® 标记步骤 重要：在您开始之前，对照表1（Super-n-stain® 抗体兼容性和标记步骤选择指南）确定您的抗体组成和浓度是否适用Super-n-stain® 标记，以及哪种标记步骤适合您选择。如果有必要，联系抗体厂家了解您的抗体IgG和抗体稳定剂的浓度。1. 抗体浓度0.5-1 mg/mL是较合适的标记浓度。如果抗体是冻干形式或浓度更浓，用PBS溶解或稀释抗体。将需要标记的抗体转移到干净的管子里。确保IgG 的μg数匹配试剂盒的标记范围。2. Super-n-stain® 反应缓冲液和Super-n-stain® 存储缓冲液恢复室温。短暂离心试剂瓶将液体集中到底部。3. 以1:10混合10 × Super-n-stain® 反应缓冲溶液与抗体，使抗体溶液最终形成1×反应缓冲液（例如9 μL的抗体加1 μL 10×反应缓冲液）。移液器上下吹吸混合。4. 将上步的溶液全部转移至YF染料瓶中，这里不需要检测瓶中染料的含量，涡旋几秒钟。5. 室温避光孵育30 min。

6. 用存储缓冲液稀释标记的抗体，将全部标记抗体溶液转移到存储缓冲液中，抗体现在就可以直接用于染色，YF标

记抗体的浓度大约是起始抗体标记数量除以总体积。注意：抗体存储缓冲液包含2 mM NaN3。7. 标记抗体4℃避光至少可以稳定存储6个月，此外，可以将抗体分装成多份小包装在-20℃长期储存。注意：如果您不喜欢使用抗体稀释缓冲液，可以将溶液分装成多份小包装-20℃储存，避免有反复冻融，标记抗体至少可以稳定储存6个月。

C. Super-n-stain®优化标记步骤

重要：在您开始之前，对照表1（Super-n-stain® 抗体兼容性和标记步骤选择指南）确定您的抗体组成和浓度是否适用Super-n-stain® 标记，以及哪种标记步骤适合您选择。如果有必要，联系抗体厂家了解您的抗体IgG和抗体稳定剂的浓度。1. 蛋白（IgG和稳定剂蛋白）浓度0.5-1 mg/mL是较合适的标记浓度，如果需要，用PBS溶解或稀释。确保蛋白的μg总量匹配试剂盒的标记范围，如果待标记的IgG少于试剂盒的最低标记量，加入BSA使BSA和IgG的蛋白总量适配试剂盒。2. Super-n-stain® 反应缓冲液和Super-n-stain® 存储缓冲液恢复室温。短暂离心试剂瓶将液体集中到底部。3. 以1:10混合10×Super-n-stain® 反应缓冲溶液与抗体，使抗体溶液最终形成1×反应缓冲液（例如9 μL的抗体加1 μL 10×反应缓冲液）。移液器上下吹吸混合。4. 将上步的溶液全部转移至YF 染料瓶中，这里不需要检测瓶中染料的含量，涡旋几秒钟。5. 室温避光孵育30 min。6. 可选择步骤：将全部标记抗体溶液转移到试剂盒的存储缓冲液中，但这会使得IgG溶液被稀释，不利于后续实验，将抗体转移到存储缓冲液，不进行额外稀释，按照下面的步骤操作。注意：抗体存储缓冲液包含2 mM NaN3。7. 标记反应转移到超滤管膜上（或是之前抗体纯化使用后保存的超滤管），离心机14000 g离心直到所有的液体过滤到接收瓶中。8. 添加适当体积的抗体储存液至超滤管膜，在膜表面小心上下抽吸PBS以重悬抗体。注意：抗体存储缓冲液包含2 mM NaN3。

9. 转移回收的抗体溶液至新管中。抗体可以直接用于染色。

10. 标记抗体4℃避光至少可以稳定存储6个月，此外，可以将抗体分装成多份小包装在-20℃长期储存。

注意事项

1. 管子从冰箱拿出需先恢复至室温，再揭开管子封口膜打开产品，避免产品回潮，影响产品使用效果。

Super-n-stain® 抗体标记试剂盒常见问题