产品介绍

产品货号：F3018

储运条件

-20℃避光保存，有效期见外包装；冰袋运输。

产品特点

荧光亮度强：荧光亮度是 Fluo-4 AM 的两倍，是 Fluo-3 AM 的四倍。

加载条件灵活：温度依赖性不高，在室温或 37° C 孵育染色效果均良好，更适用于高通量筛选实验

可见光激发：提高操作便捷性，组织的穿透性好，且对样本友好

产品组别

产品参数

外观：可溶于DMSO的橙红色固体粉末

Ex/Em：495/516 nm（结合Ca2＋后）

CAS号：1345980-40-6

分子式：C50H50N2O23

分子量：1046.93

分子结构图：

光谱图：

注意事项

1. 如果使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM ester，从而降低Fluo-8, AM ester进入细胞的效果。另外，含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，加工作液前应尽量去除残留培养基。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光。

3. Fluo-8, AM ester遇水极易分解，如果不能一次用完，建议将储液小量分装保存。

4. 本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法

1. 工作液准备：

1). 用PBS或HBSS稀释Fluo-8, AM ester储液，制备2-20 μM的Fluo-8, AM ester工作液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为4-5 μM的Fluo-8, AM ester工作液.

注：为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用最低探针浓度，可从4 μM开始摸索。

2). (可选）如果Fluo-8, AM ester进入细胞的效果不好，可向Fluo-8, AM ester溶液中加入适量20% Pluronic F-127溶液，防止Fluo-8, AM ester在缓冲液中聚集并促进Fluo-8, AM ester进入细胞，Pluronic F-127终浓度控制在0.04~0.05%。

注：

(1) 20% (w/v)的Pluronic F-127 DMSO母液配制：100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO，配制成20% (w/v)的DMSO母液。溶解需要在40~50℃加热20~30 min。溶解后室温保存，勿冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

1. Pluronic F-127可降低Fluo-8, AM ester的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储液中。

2. 如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒 （1-2 mM） 添加到染料工作溶液中（最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯指示剂的泄漏。

2. 染色步骤：

1). 取出预培养的细胞，除去培养基。

2). 将Fluo-8, AM ester工作液加入细胞中，加入量以覆盖细胞为准。在37℃ 或室温下培养 30~60 min。

注：如果首次实验不能确定孵育温度和时间，建议尝试37℃孵育40 min，观察荧光效果。若细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。

3). 去除Fluo-8, AM ester工作液，并用 HHBS 或其他生理缓冲液替换，去除多余探针。

3. 荧光检测：

用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪根据波长 Ex/Em = 495/516 nm 来进行检测。

FAQ

1. 问：Fluo-8, AM ester孵育后发现细胞死亡太多怎么办？

答：首先应评估染料的浓度和处理时间是否合适。Fluo-8, AM ester虽然相对较为安全，但过高的浓度或过长的染色时间仍可能导致细胞损伤。建议降低染料浓度或缩短染色时间，并在实验过程中密切观察细胞状态

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