适用于一般细胞，肿瘤细胞，部分干细胞等。

◆如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?
血清解冻时应将血清从-15~-70℃的低温冰箱中取出放入4℃冰箱解冻1天，待全部解冻后再分装。解冻过程中请不时摇匀（小心勿造成气泡），使血清成分和温度均匀，从而减少沉淀的产生。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻，并避免反复冻融。需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在 37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。

◆有时在血清中见到的絮状沉淀可能是些什么物质？
主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量，可用400 xg离心5 min去除，也可不用处理。

◆如何避免血清中产生沉淀?
(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
(2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。
(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

◆在使用前是否需要对血清进行过滤？
一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。

◆自然溶化好的胎牛血清放在室温下一晚还能用吗？
室温不可以，建议4℃保存。

◆加到培养基中的血清必须灭活吗？
不是必须的，看做什么实验。如果用于培养普通细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。

◆热灭活对血清的作用是什么？
热灭活步骤能够灭活补体系统。补体会参与以下事件中：溶解细胞事件，平滑肌收缩，肥大细胞与血小板释放组胺，吞噬作用增强，趋化作用，淋巴细胞与巨噬细胞的活化等。

◆细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好，反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

◆细胞培养中如何防止黑点生成?
(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
(2) 培养基无需37℃水浴。
(3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。
(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

Bin Gao , Xiaoyu Wang , Meiyu Wang , Wen Liu , Ying Li , Shihai Xia , Wencheng Zhang , Yakai Feng
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