产品概述：
产品参数
外观：可溶于DMSO 的灰白色固体
CAS号：148504-34-1
Ex/Em：494/517 nm (pH =8)
分子式：C46H46N2O23
分子量：994.9
分子结构图：
储存条件
-20℃ 避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
Calcein AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，它可以穿透细胞膜进入细胞，被细胞内的酯酶剪切形成 Calcein，从而被滞留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein AM 的细胞毒性很低。Calcein 的激发和发射波长分别为 490 nm 和 515 nm。Calcein AM 仅对活细胞染色。可与 PI 联用，用于区别活细胞和死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议根据实际情况确定 Calcein AM 的最适浓度。
注意事项
1. Calcein AM 的酯键遇到湿气会分解，使用后请在 -20℃ 下密闭冷冻保存，防止水分进入。
2. Calcein AM 储备液稀释后请及时使用，尽量现配现用。
常见问题解答：
◆细胞追踪有很多产品，该如何选择？
首先确定追踪细胞的时间，然后考虑染料结合机制。
1.钙黄绿素染料（C4041）标记均匀且对短期细胞迁移示踪效果极佳，但也会被某些类型细胞迅速外排。
2.亲脂性的花青素染料，如DiI（D4010），DIO（D4007），DiA(D4059)，DiD(D4019)，DiR(D4006)能标记细胞膜而不破坏其功能，并且能持续更长时间，但如果发生膜融合则可能会染上其他细胞。此外，它们还会在透化过程中丢失。
3.CellTracker染料（C4060）更有利于长期标记，其带有温和的氯甲基反应基团使之能够与细胞组分共价结合。
4.CFDA SE（C4070）也能共价地结合于细胞组分。
在所有列出的试剂中，细胞内保留与否取决于细胞分裂的速率和细胞的固有特性（主动外排，膜和蛋白质的周转率等）。其中共价结合试剂比非共价结合的试剂展现出更长的保留时间
◆用Calcein，AM标记了细胞，但是第二天成像时，没有来自Calcein的荧光，为什么？
Calcein，AM是细胞追踪和普通细胞质染色的良好选择，然而，它不与任何东西结合，可能会在几个小时内被主动抽出细胞，钙黄绿素在活细胞内的保留取决于细胞类型和培养条件的固有特性
对于长期成像，您可能希望考虑反应性细胞质染色，如CFDA，SE染料
◆我想在活细胞中加入一种染料，使其在高浓度下自猝灭，但如果细胞死亡，染料将被释放并取消猝灭。有这样的吗？
可以的，这通常是通过钙黄绿素AM或FDA（荧光素二乙酸酯）完成的。这些染料在被酯酶分解之前不会发出荧光。经酯酶修饰后，在非常高的浓度下，它们会自我猝灭。一旦质膜破裂或细胞死亡，染料将被释放到细胞外介质中，并变得不猝灭。必须优化浓度和培养时间，以获得足够的淬火效果
◆当我用钙黄绿素 AM对细胞进行染色时，细胞经过固定处理后信号就消失了，为什么？
Calcein AM扩散到细胞中，“AM”部分由细胞酯酶裂解，随后染料分子的荧光信号可以在细胞质中被观测到，但其不结合到细胞组分。这意味着它们能够为“整个细胞”染色。这也意味着染料不能通过醛类固定剂进行交联，因此染料会在固定时丢失。此外，质膜的任何干扰（例如去垢剂或胰蛋白酶处理）都会导致染料从细胞中渗漏。
◆想做一个细胞迁移研究大约4个小时，需要用染料荧光标记细胞，您有什么推荐的吗？
Calcein AM和FDA（荧光素二乙酸盐）是用于该应用的一些染料的实例，由于这些染料不与任何细胞组分结合或共价连接，它们可能具有短的保留时间，因为一些细胞类型可能主动将染料从细胞中流出
使用本产品的文献：
引用文献
1.Methods for the assessment of mitochondrial membrane permeabilization in apoptosis
应用方向：活细胞染色
2.A fluorometric assay for the quantitation of cell adherence to endothelial cells
应用方向：细胞增殖和功能
3.Localization and activity of multidrug resistance protein 1 in the secretory pathway of Leishmania parasites
应用方向：细胞示踪
4.Viability assessment of turkey sperm using fluorescent staining and flow cytometry
应用方向：细胞流式
5.Visualization of keratocytes in the human cornea with fluorescence microscopy
应用方向：组织切片染色
6.An accurate, precise method for general labeling of extracellular vesicles
应用方向：外泌体完整性检测。如果外泌体完整性很好，绿色荧光就可以保留在外泌体中，反之，则会从外泌体中泄漏出来
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