储存条件

-20℃保存，有效期见外包装

应用范围

真核基因表达调控研究

产品特点

1. 快速：细胞裂解在10-15 min内完成。

2. 方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

3. 灵敏：能够检测最低10^-20 mol的萤光素酶。

4. 酶的浓度线性范围可达8个数量级。

产品组分

产品介绍

真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。该产品为萤火虫萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。能够检测最低10-20 mol的萤光素酶，在10-14至10-20 mol的酶浓度范围内呈很好的线性关系。

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 温度会对酶的活性产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。

3. 如果单管萤光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。

4. 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560 nm。

5. 为防止孔间干扰，建议使用白色不透光孔板。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

(1）可能为转染效率低
a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；
b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；
c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。
(2）可能为启动子活性低或诱导失败
a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；
b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；
c.更换强启动子（如SV40、CMV）。
注：海肾萤光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK启动子。
(3）样品裂解效率低
a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。
b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。
(4）检测过程操作不规范
a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；
b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；
c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；
d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。
(5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，萤火虫荧光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；
b.反应工作液建议现用现配。

◆进行检测的过程中，萤光信号值太高该如何进行调整？
（1） 减少质粒转染量。
（2）细胞样品裂解后，离心取上清后检测或对裂解产物进行稀释后检测。
注：不建议通过减少底物量来降低荧光值，需要保证底物的饱和来反映萤光素酶真实的表达水平，否则会造成检测结果出现大的偏差。