产品概述：
产品内容：
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组分 |
J6004S (20T) |
J6004L (100T) |
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A: JC-1, 100× in DMSO |
100 μL |
500 μL |
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B: 10× Assay Buffer |
2 × 1 mL |
10 mL |
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C: CCCP, 50 mM |
10 μL |
50 μL |
储存条件
-20℃避光冷藏，其中B组份也可4℃保存。为避免反复冻融，A与C组份建议分装。有效期见外包装。
光谱特性
Ex/Em：510/527 nm （单体物，绿色）
585/590 nm （聚合物，红色）
产品介绍
线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志，它发生在细胞膜上的磷酯酰丝氨酸外翻与Caspase水解酶激活之前。当线粒体膜通透性发生改变时，膜电位会降低。这种膜电位的改变是由于Bax二聚体的形成和 Bid, Bak, Bad的激活，从而诱导线粒体膜形成孔隙造成的。当这些促凋亡蛋白被激活时，线粒体同时也将细胞色素C释放到细胞质中。
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm的理想荧光探针，它可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，可以产生绿色荧光。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为510 nm，最大发射波长为527 nm；JC-1 聚合物的最大激发波长为585 nm，最大发射波长为590 nm。本试剂盒操作简单快速，可以通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪进行检测，同时提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. JC-1(100× in DMSO)在较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. 配制JC-1染色工作液时，必须先把试剂盒提供的JC-1(100× in DMSO)用灭菌diH2O充分溶解混匀后，才可以加入10× Assay Buffer。不可先配制1× Assay Buffer再加入JC-1(100× in DMSO)，这样JC-1会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。
4. JC-1染色完成后用1× Assay Buffer洗涤时，使1× Assay Buffer保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
5. JC-1染色并洗涤完成后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
6. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题解答：
◆在测线粒体膜电位时，未处理的细胞也会发出荧光，而且在试验样品中为什么没有看到显著差异？
无论您使用哪种染料，四甲基罗丹明甲酯（TMRM）还是MitoTracker Red FM，未处理的细胞都会发出荧光。只要细胞线粒体膜电位降低就会导致荧光信号降低，最重要的是变化的程度。当线粒体膜电位发生改变时，JC-1染料不仅强度改变，还有激发和发射比例光谱的改变。设置未处理的对照和用线粒体膜电位去稳定剂（如CCCP或FCCP）处理的阳性对照是非常重要的。这些染料仅用于活细胞，在固定处理的细胞中无法保留相同程度的信号。
◆用PFA固定是否可行（现场成像后，用于储存）？或者这会干扰染料信号吗？
如果您想保持JC-1染料和固定后检测到的线粒体膜电位之间的关系，这是不可能的，这是因为JC-1依赖于线粒体膜电位，而线粒体膜电位将被固定所消除。
◆请问做JC-1培养板该如何选择？比如用酶标仪检测吸光度的话是否一定需要在避光培养板中做？普通的透明板可以吗？如果用荧光显微镜观察拍照的话又应该用什么板呢？
荧光酶标仪检测的话要选用黑色的酶标板，荧光显微镜拍照的话可以用透明的板子
◆请问，对于从动物组织中用线粒体提取试剂盒提取出来的线粒体，用CCCP设置阳性对照组时，应该用什么浓度处理多长时间，不同组织中提纯出来的线粒体，处理方式是否不同？
纯化的线粒体不适合用于CCCP做阳性对照
◆可以用来组织切片染色吗，如果可以需要注意什么呢？适用于组织的流式检测吗?
需要新鲜组织，先提取纯化线粒体再检测,可能不太适合做流式
◆请问CCCP对细胞膜电位的抑制作用可以有多长，我想测试长时间的48h？之后再染JC-1，有什么建议吗？
对于大多数细胞，通常10µM CCCP处理20分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-1染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料确定
◆你好，请问染完色后，用抗淬灭剂封片后免疫荧光显微镜观察，镜下观察细胞会移动，拍出来的照片是模糊的，请问出现这种情况一般考虑什么问题？怎么解决呢？
可能是细胞没固定的原因，一般可以在孔板里染色后直接用倒置显微镜在孔板里观察，不用封片
◆请问用纯化的线粒体比直接用细胞测流式有什么优势吗？是孵育的时间比较短吗？直接用细胞做的，趋势不明显，如果提取线粒体后去测会不会得到更明显的结果？
提取的纯化线粒体是细胞器一般建议用荧光酶标仪检测相应的红绿荧光值，纯化的线粒体染色更好染一些，相对于细胞来说可能会更好检测一些
使用本产品的文献：
1.Alpiniae oxyphyllae fructus possesses neuroprotective effects on H2O2 stimulated PC12 cells via regulation of the PI3K/Akt signaling Pathway
Ruolan Li, Lingyu Wang, Qing Zhang, Huxinyue Duan, Die Qian, Fei Yang, Jun Xia
Frontiers in Pharmacology
2.Pathologically high intraocular pressure induces mitochondrial dysfunction through Drp1 and leads to retinal ganglion cell PANoptosis in glaucoma
Zhou Zeng , Mengling You , Cong Fan , Rong Rong , Haibo Li , Xiaobo Xia
Redox biology
参考文献
1.Mitochondrial membrane potential and nuclear changes in apoptosis caused by serum and nerve growth factor withdrawal: time course and modification by (-)-deprenyl
应用方向：荧光相对比率
2.Hsp60 regulation of tumor cell apoptosis
应用方向：细胞流式
3.Quantum dot-induced cell death involves Fas upregulation and lipid peroxidation in human neuroblastoma cells
应用方向：细胞成像
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