产品信息

储存条件

-20℃保存，有效期见外包装。B组分建议根据实验需求进行小批量分装。海肾检测工作液建议现配现用，避免反复冻融。

产品介绍

真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。该产品为海肾萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。

产品特点

1.快速：细胞裂解在10-15 min内完成。

2.方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2.由于温度对酶反应有影响，所以测定时，样品和试剂均需达到室温后再进行测定。

3.海肾萤光素酶催化的生物发光的最强波长为480 nm，为防止孔间干扰，建议使用白色不透光孔板。

4为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（1）可能为转染效率低
a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；
b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；
c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。
（2）可能为启动子活性低或诱导失败
a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；
b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；
c.更换强启动子（如SV40、CMV）。
注：海肾萤光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK启动子。
（3）样品裂解效率低
a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。
b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。
（4）检测过程操作不规范
a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；
b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；
c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；
d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。
（5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，萤火虫萤光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；
b.反应工作液建议现用现配。

◆进行检测的过程中，萤光信号值太高该如何进行调整？
（1） 减少质粒转染量。
（2）细胞样品裂解后，离心取上清后检测或对裂解产物进行稀释后检测。
注：不建议通过减少底物量来降低荧光值，需要保证底物的饱和来反映萤光素酶真实的表达水平，否则会造成检测结果出现大的偏差。