产品概述：
产品货号及规格
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货号 |
产品名称 |
规格 |
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C6043S |
YF®488 Click-iT EdU 通用款细胞增殖检测试剂盒（绿色荧光） |
2-20T |
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C6043M |
10-100T |
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C6043L |
50-500T |
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C6044S |
YF®555 Click-iT EdU 通用款细胞增殖检测试剂盒（橙红色荧光） |
2-20T |
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C6044M |
10-100T |
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C6044L |
50-500T |
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C6045S |
YF®594 Click-iT EdU 通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光） |
2-20T |
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C6045M |
10-100T |
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C6045L |
50-500T |
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C6046S |
YF®647A Click-iT EdU 通用款细胞增殖检测试剂盒（远红荧光） |
2-20T |
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C6046M |
10-100T |
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C6046L |
50-500T |
产品内容
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规格 组分 |
2-20T |
10-100T |
50-500T |
开封后保存温度 |
稳定性 |
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A. 10 mM EdU |
40 µL |
200 µL |
1 mL |
-20℃ |
开封后按指定温度保存可有效放置一年 |
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B. YF® 488/555/594/647A Azide |
10 µL |
50 µL |
250 µL |
-20℃，避光 |
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C. 10× Click-iT EdU反应缓冲液 |
200 µL |
1 mL |
5 mL |
2-8℃ |
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D. CuSO4 |
100 µL |
500 µL |
2× 1.25 mL |
2-8℃ |
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E. Click-iT EdU缓冲液添加物 |
6 mg |
30 mg |
150 mg |
2-8℃ |
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F. Hoechst 33342 |
5 µL |
25 µL |
125 µL |
2-8℃ |
规格：如果用于荧光显微镜检测，所能使用次数为上述各个规格的最大使用次数（针对96孔板培养的细胞），如C6043S可检测20个孔的样品（不同容器的具体用量可参考附表1）；如果用于流式检测，所能使用次数为上述各个规格的最小使用次数，如C6043S可检测2个样品。
荧光光谱数据：YF® 488 Azide：495/519 nm；YF® 555 Azide：555/565 nm；YF®594 Azide：590/617 nm
YF® 647A Azide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm（bound to DNA）
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。
产品介绍
本试剂盒中，EdU含有炔烃，YF® 488/555/594/647A Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。BrdU方法需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用DNase消化）暴露出BrdU，从而方便BrdU抗体结合；而EdU法只需多聚甲醛固定和Triton X-100促渗就可以使检测试剂进入细胞，只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于体外培养细胞的增殖检测。
注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，实验操作时请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3. Click-iT EdU缓冲液添加物溶液最好现配现用，以保证最佳结果。
常见问题解答：
◆YF®488/555/594/647有什么区别？
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同，可根据偏好或需求进行选择。
◆EdU试剂盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？
清洗步骤中，BSA可以终止掉未反应的甲醛。
◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测？
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗？检测顺序是什么？
本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，故染色后无法直接检测GFP，建议使用GFP抗体间接检测。
◆观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应，验证Click反应信号的特异性。
◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？
1.请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
2.为确保Click反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；
3.由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；
4.当铜离子在合适的化合价时，Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为一价铜(Cu+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。
◆如何对细胞核进行复染？
试剂盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色，也可选择使用DAPI。
◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?
可以。EdU是小分子，可以穿透植物细胞的细胞壁。
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