UE质粒中量制备试剂盒_苏州优逸兰迪生物科技有限公司

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UE质粒中量制备试剂盒

产品货号: UE-MD-P-10/UE-MD-P-25

产品规格: 10T/25T

目录价（元）:675/1262
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使用本产品的文献

产品概述：

本试剂盒采用改进的SDS 碱裂解法，结合 DNA 制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒 DNA 的目的。适合于从30-100 ml细菌培养物中提取多至100 μg 高纯的质粒 DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

一、试剂盒组成、贮存、稳定性

Cat.No.	UE-MD-P-5	UE-MD-P-10	UE-MD-P-25
Kit size	5 preps	10 preps	25 preps
Midiprep column	5	10	25
1.5 ml Microfuge tube	10	20	50
Plastic wrench	1	1	1
RNase A	60 μl	120 μl	270 μl
Buffer S1	30 ml	55 ml	125 ml
Buffer S2	30 ml	55 ml	125 ml
Buffer S3K	30 ml	55 ml	125 ml
Buffer B	30 ml	55 ml	125 ml
Buffer W1	40 ml	80 ml	2×100 ml
Buffer W2 concentrate	18 ml	36 ml	72 ml
Eluent	3 ml	6 ml	20 ml
Protocol manual	1	1	1

RNase A：50 mg/ml, 室温贮存6个月；长期贮存于-20℃。

Buffer S1：细菌悬浮液。加入RNase A后，混合均匀，4℃贮存。

Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH）。室温密闭贮存。

Buffer S3K：中和液，室温密闭贮存。

Buffer B：DNA结合溶液，室温密闭贮存。

Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。

Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）,混合均匀，室温密闭贮存。

Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。

说明书：

UE-UE-MD-P-10/UE-MD-P-25

常见问题解答：

◆同样体积的新鲜菌液，为什么有些提取的质粒浓度高，而有些质粒的浓度低？这些情况应该如何处理？
质粒提取高低的一个重要决定性因素是质粒载体的拷贝数，即质粒在一个大肠杆菌中的数目。对于低拷贝数的质粒，需要适当增加菌液的收集量，详情请参阅说明书。
以下是几种常见载体的拷贝数：

◆使用UE质粒中量制备试剂盒时，在DNA结合/洗涤步骤中能否使用离心法？
不建议使用。UE质粒中量制备试剂盒中的质粒制备管不能与常规的15ml，50ml离心管配套，所以无法使用。您可以通过使用负压装置来解决这一问题。如果无法取得相配套的负压装置，可以尝试手推过滤器的方式进行，但这样的操作容易引起污染。

◆我提取的质粒为什么会有基因组条带？
菌体在裂解和中和过程中如果操作过于剧烈就容易引起基因组污染。加入Buffer S2后要轻柔混匀，加入Buffer S3后混合均匀。如果发现裂解物在操作过程中过于黏稠，需要适当降低菌体的用量。

◆我提取的质粒在电泳图片上看，有一条紧挨着主带的小条带请问这是什么原因？如何判定它是否是杂带？
那条带很有可能就是变性条带。如果在加入Buffer S2后没有及时混匀菌体，会导致菌体局部碱性过强，破坏质粒的结构，在加入Buffer S3后质粒无法完全复性，就产生了这样的变性条带。
检测的方式是通过酶切检测，如果这条带在酶切后依然存在，则是变性条带，如果酶切后消失，则可能是质粒的不同状态。

◆我提取的质粒有明显的RNA污染，请问是什么原因？
可能有以下两种可能：
1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4℃冰箱。如果室温放置，RNase A活力会下降，导致RNA污染。
2、菌体过量。如果使用的菌体量过多，也可能导致RNA污染。适当减少菌体的用量。

◆质粒得率很低，请问是什么原因？
质粒低的可能因素很多，以下是几种可能原因：
1、菌体过量，导致菌体不能完全裂解和中和，最终导致质粒得率低。
2、Buffer W2中未按瓶子上得标注体积加入乙醇。
3、菌体老化，影响提取的效果。建议对菌液进行划板培养，筛选新鲜克隆。

◆请问Eluent Buffer的配方是什么？对于DNA测序有没有影响？
Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl,pH8.0。质粒在这样的溶液中能够稳定保存，而且测序不受影响。