产品概述:
储存条件
Buffer RL: 红细胞裂解液。室温密闭贮存。
Buffer R-Ⅰ: 细胞裂解液。室温密闭贮存。
Buffer R-Ⅱ: 中和液。室温密闭贮存。
Buffer W1A concentrate: 洗涤液。使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用无水乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用无水乙醇或95%乙醇), 混合均匀,室温密闭贮存。
Buffer TE(DNase & RNase-free): 洗脱液。10 mM Tris-HCL 0.1 mM EDTA, pH 7.5。室温密闭贮存。
流程图
说明书:
常见问题解答:
◆红细胞没有完全裂解
·第2步中,冰浴后混浊的悬液没有变澄清
适当延长冰上孵育时间至20min。
·在第3步时,离心沉淀仍然是红色的
在第4步时加入Buffer RL后再增加冰上孵育时间5-10min。
◆RNA提取得率低
·组织用血量太少或者太多
起始血量过少,则RNA含量较低;起始血量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
·取样为上清液时,尽量吸尽上清(如细胞培养上清)。
·洗脱液温度过低
可以将洗脱液在65℃预热后使用。
◆OD260/OD280比值偏低
·蛋白质污染
在加入Buffer R-II中和离心后避免将沉淀物转移到RNA结合膜上。
·用水稀释样品
RNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定,低离子强度或低pH值会使OD280值升高。
·确认Buffer W1A和Buffer W2加入的乙醇是否是100%无水乙醇/95%乙醇,加入体积是否正确。
◆RNA降解
·蛋白质污染
在加入Buffer R-II中和离心后避免将沉淀物转移到RNA结合膜上。
·用水稀释样品
RNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定,低离子强度或低pH值会使OD280值升高。
·确认Buffer W1A和Buffer W2加入的乙醇是否是100%无水乙醇/95%乙醇,加入体积是否正确。
◆基因组DNA污染
·血样用量过多
血样用量超出了裂解液Buffer R-I的处理范围。请选择合适的样本处理量。
·样品中含有有机溶剂(如乙醇、DMSO等)。避免这些会引起裂解液性质改变的物质。
·加入Buffer R-II离心后,取上清时避免吸入沉淀。