产品概述：
本试剂盒适合从PCR、酶促反应、测序反应的反应液中提取多至20 μg DNA（100 bp-15 kb）,回收率为80%以上，尤其适用于大量体积（>50μl）或者核酸质量>5μg PCR产物回收。纯化的DNA不含引物、酶蛋白及单核苷酸。
一、试剂盒组成
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Cat.No. |
UE-MX-PCR-10 |
UE-MX-PCR-50 |
UE-MX-PCR-250 |
UE-MX-PCR-500 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
500 preps |
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Miniprep column B10 |
10 |
50 |
250 |
500 |
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2 ml Collection tube |
10 |
50 |
250 |
500 |
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Buffer PCR-A |
4 ml |
20 ml |
100 ml |
200 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
2×72 ml |
2×120 ml |
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Eluent |
1 ml |
5 ml |
25 ml |
50 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
1 |
二、注意事项
1. 本试剂盒适用于无选择性的回收所有核酸片段，如果选择性的回收特定片段，请选择UE DNA凝胶回收试剂盒系列。
2. 如果回收前核酸片段含量1-5 μg，UE-PCR和UE-MX-PCR都适用，洗脱液体积添加30-50 μl；回收前核酸片段含量5-20 μg，请选择UE-MX-PCR，洗脱液体积添加50-100 μl。
3. 回收率与初始核酸量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少（洗脱体积不低于20 μl），回收率越低。
4. Buffer PCR-A含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
5. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCI，pH7.0-8.5洗脱液中保存。
6. 提高回收量建议：
1）混合液转移至吸附柱B10可以放置2-5 min；
2）混合液分2-3次重复离心；
3）加热洗脱液温度；
4）洗脱液二次重复洗脱。
三、实验准备
1. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
2. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
3. 使用前，检查 Buffer PCR-A 是否出现沉淀，若出现沉淀，应于65℃ 温浴加热至沉淀完全溶解并冷却至室温后再使用。
4. 将Eluent或去离子水加热至65℃，有利于提高洗脱效率。
常见问题解答：
◆洗脱产物的DNA量很少或没有
·所提样品材料老化或反复冻融导致基因组DNA含量下降
应选择新鲜的样品材料，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等，不能及时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存，以免DNA降解。
·样品过多导致细胞处理不完全
样品破壁或裂解不完全导致基因组DNA未充分释放动、植物材料应在液氮中充分研磨匀浆
·DNA洗脱效率不高
W2中没有加无水乙醇或者使用了低浓度的乙醇代替无水乙醇。最后一次buffer W2洗涤完后不要将制备管放于负压装置上抽的过干。洗脱液pH值过低会降低洗脱效率，应确保洗脱液pH值7.0-8.5之间；洗脱时可将洗脱缓冲液在65℃水浴预热，加入洗脱液后在室温静置2-5分钟，可提高洗脱效率，提高基因组DNA的产量。
◆A260/280比值过低
·样品量过多导致细胞裂解不充分
样品量过多从而导致样品裂解不彻底，残留大量蛋白、多糖、脂类等杂质，为后续吸附柱分离纯化造成影响。应加入适当量的样品材料。
◆RNA污染 (A260/280比值偏高)
·RNase A可能失活
RNase A需按照说明书或者标签指示保存。低温保存时RNase A比较稳定，不易失活，但如果反复冻融会导致RNase A降解失活，所以应妥善保存。
忘记使用RNase A
◆基因组DNA有降解
·完全降解的基因组DNA在凝胶电泳上会出现模糊的条带或者是拖尾现象。
选取的材料不新鲜或反复冻融，采集材料后未及时处理或未低温保存。陈旧血液、老化菌液等不新鲜的材料中，细胞凋亡导致DNA降解，或低温保存的样品反复冻融导致细胞破碎，内源核酸酶降解DNA，因此应选择新鲜的材料样品，不能及时处理则低温保存，运输过程中亦应使用干冰。
·未能有效抑制内源核酸酶作用
某些DNase含量较丰富的动、植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆，研磨过程中应随时补充液氮，并在样品未完全解冻前即加入含有抑制核酸酶作用的鳌合剂的裂解液。
·操作过于剧烈导致DNA被机械打断。
◆基因组DNA酶反应效果不佳
·DNA纯度低
样品过多导致裂解不充分，从而引起大量蛋白、多糖、脂类等杂质残留，影响后续酶切反应效果。可适当减少样品初始量。
·盐分污染
可以用2× Buffer W2进行洗涤
·乙醇污染
在最后一次 Buffer W2 洗涤后可将制备管由原来离心1min增加至离心2min。
◆制备管堵孔
·样品过多
·裂解不充分
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