产品概述：
本试剂盒采用独特的裂解和蛋白酶K消化技术，结合 DNA 制备膜选择性地吸附DNA的方法达到纯化基因组DNA的目的。每次制备可获得多至20 μg的基因组 DNA。 用于PCR、Southern印迹分析、RAPD 、RFLD 等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
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Cat.No. |
UE-MN-MS -GDNA-10 |
UE-MN-MS -GDNA-50 |
UE-MN-MS -GDNA-250 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
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Miniprep column |
10 |
50 |
250 |
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2 ml Microfuge tube |
20 |
100 |
500 |
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1.5 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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RNase A |
12 μl |
60 μl |
300 μl |
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Buffer C-L |
2 ml |
9 ml |
45 ml |
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Proteinase K |
4 mg |
18 mg |
90 mg |
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PK Buffer |
260 μl |
1.2 ml |
6 ml |
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Buffer P-D |
5 ml |
25 ml |
125 ml |
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Buffer W1 |
6 ml |
30 ml |
145 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
120 ml |
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Eluent |
3 ml |
12 ml |
60 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
Miniprep column：小量制备管。室温密闭贮存。
RNase A：50 mg/ml，室温保存。
Buffer C-L：裂解液，室温密闭贮存。
Proteinase K：冻干的蛋白酶K可室温贮存6个月，长时间保存请置于4℃；溶解后，在2-8℃可贮存2个月，长时间保存请勿置于室温中。
Buffer PK：蛋白酶K溶解液，室温密闭贮存。
Buffer P-D：蛋白去除液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCI，pH 8.5，室温密闭贮存。
二、注意事项
Buffer C-L 、Buffer P-D 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
常见问题解答：
◆洗脱产物的DNA量很少或没有
·所提样品材料老化或反复冻融导致基因组DNA含量下降
应选择新鲜的样品材料，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等，不能及时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存，以免DNA降解。
·样品过多导致细胞处理不完全
样品破壁或裂解不完全导致基因组DNA未充分释放动、植物材料应在液氮中充分研磨匀浆
·DNA洗脱效率不高
W2中没有加无水乙醇或者使用了低浓度的乙醇代替无水乙醇。最后一次buffer W2洗涤完后不要将制备管放于负压装置上抽的过干。洗脱液pH值过低会降低洗脱效率，应确保洗脱液pH值7.0-8.5之间；洗脱时可将洗脱缓冲液在65℃水浴预热，加入洗脱液后在室温静置2-5分钟，可提高洗脱效率，提高基因组DNA的产量。
◆A260/280比值过低
·样品量过多导致细胞裂解不充分
样品量过多从而导致样品裂解不彻底，残留大量蛋白、多糖、脂类等杂质，为后续吸附柱分离纯化造成影响。应加入适当量的样品材料。
◆RNA污染 (A260/280比值偏高)
·RNase A可能失活
RNase A需按照说明书或者标签指示保存。低温保存时RNase A比较稳定，不易失活，但如果反复冻融会导致RNase A降解失活，所以应妥善保存。
忘记使用RNase A
◆基因组DNA有降解
·完全降解的基因组DNA在凝胶电泳上会出现模糊的条带或者是拖尾现象。
选取的材料不新鲜或反复冻融，采集材料后未及时处理或未低温保存。陈旧血液、老化菌液等不新鲜的材料中，细胞凋亡导致DNA降解，或低温保存的样品反复冻融导致细胞破碎，内源核酸酶降解DNA，因此应选择新鲜的材料样品，不能及时处理则低温保存，运输过程中亦应使用干冰。
·未能有效抑制内源核酸酶作用
某些DNase含量较丰富的动、植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆，研磨过程中应随时补充液氮，并在样品未完全解冻前即加入含有抑制核酸酶作用的鳌合剂的裂解液。
·操作过于剧烈导致DNA被机械打断。
◆基因组DNA酶反应效果不佳
·DNA纯度低
样品过多导致裂解不充分，从而引起大量蛋白、多糖、脂类等杂质残留，影响后续酶切反应效果。可适当减少样品初始量。
·盐分污染
可以用2× Buffer W2进行洗涤
·乙醇污染
在最后一次 Buffer W2 洗涤后可将制备管由原来离心1min增加至离心2min。
◆制备管堵孔
·样品过多
·裂解不充分
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