产品概述：
本试剂盒采用改进的SDS 碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。适合于从120-300 ml 细菌培养物中提取多至600 μg高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
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Cat.No. |
UE-MX-P-10 |
UE-MX-P-25 |
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Kit size |
10 preps |
25 preps |
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Maxiprep column |
10 |
25 |
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RNase A |
270 μl |
700 μl |
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Buffer S1 |
115 ml |
285 ml |
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Buffer S2 |
115 ml |
285 ml |
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Buffer S3K |
115 ml |
285 ml |
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Buffer B |
115 ml |
285 ml |
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Buffer W1 |
2×80 ml |
350 ml |
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Buffer W2 concentrate |
2×36 ml |
150 ml |
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Eluent |
25 ml |
60 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
二、实验准备及注意事项
1. 使用前，RNase A全部加入Buffer S1 中，4℃贮存。
2. 使用前确认Buffer S2 是否出现沉淀，如出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后使用。
3. 使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
4. 加入Buffer S2和Buffer S3K的两个步骤操作必须温和。剧烈摇晃将导致基因组DNA的污染。
5. 需要自备50 ml干净离心管。
6. 提取质粒DNA的产量与菌液浓度、菌株种类、质粒拷贝数、质粒大小等因素有关。
7. 可以提前预冷Buffer S3K和Buffer B，有助于离心沉淀。
常见问题解答：
◆同样体积的新鲜菌液，为什么有些提取的质粒浓度高，而有些质粒的浓度低？这些情况应该如何处理？
质粒提取高低的一个重要决定性因素是质粒载体的拷贝数，即质粒在一个大肠杆菌中的数目。对于低拷贝数的质粒，需要适当增加菌液的收集量，详情请参阅说明书。
以下是几种常见载体的拷贝数：
◆使用UE质粒大量制备试剂盒时，在DNA结合/洗涤步骤中能否使用离心法？
可以，使用与离心机配套的离心管可以进行离心。
◆我提取的质粒为什么会有基因组条带？
菌体在裂解和中和过程中如果操作过于剧烈就容易引起基因组污染。加入Buffer S2后要轻柔混匀，加入Buffer S3后混合均匀。如果发现裂解物在操作过程中过于黏稠，需要适当降低菌体的用量。
◆我提取的质粒在电泳图片上看，有一条紧挨着主带的小条带请问这是什么原因？如何判定它是否是杂带？
那条带很有可能就是变性条带。如果在加入Buffer S2后没有及时混匀菌体，会导致菌体局部碱性过强，破坏质粒的结构，在加入Buffer S3后质粒无法完全复性，就产生了这样的变性条带。
检测的方式是通过酶切检测，如果这条带在酶切后依然存在，则是变性条带，如果酶切后消失，则可能是质粒的不同状态。
◆我提取的质粒有明显的RNA污染，请问是什么原因？
可能有以下两种可能：
1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4℃冰箱。如果室温放置，RNase A活力会下降，导致RNA污染。
2、菌体过量。如果使用的菌体量过多，也可能导致RNA污染。适当减少菌体的用量。
◆质粒得率很低，请问是什么原因？
质粒低的可能因素很多，以下是几种可能原因：
1、菌体过量，导致菌体不能完全裂解和中和，最终导致质粒得率低。
2、Buffer W2中未按瓶子上得标注体积加入乙醇。
3、菌体老化，影响提取的效果。建议对菌液进行划板培养，筛选新鲜克隆。◆请问Eluent Buffer的配方是什么？对于DNA测序有没有影响？
Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl,pH8.0。质粒在这样的溶液中能够稳定保存，而且测序不受影响。
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