产品概述:
产品参数
外观:可溶于水的浅黄色固体
Ex/Em:328/533 nm
储存条件
-20℃干燥避光保存,有效期见外包装。
产品介绍
活体成像技术(optical in vivo imaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于萤光素酶能催化底物化学发光的原理,将体外能稳定表达萤光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应,利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。
D-Luciferin是萤光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。在ATP和萤光素酶的作用下,萤光素能够被氧化,并且在560 nm检测到其化学发光。Luciferin由luc基因编码,该基因作为报告基因在多种细胞中存在。由于化学发光的低背景性,luc基因在很低的表达水平下就可以被监测到。此外,萤光素/萤光素酶被用来测量10-15摩尔量的ATP。相比于基础版D-萤光素钾盐(D1009),D-萤光素钾盐(增强型)在相同浓度下,底物与萤光素酶反应后发光更强且更持久。
使用方法
1. 体外发光检测
(1)用314 µL蒸馏水溶解10 mg D-萤光素钾盐,配制成100 mM的储存液(200×)。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
(2)用细胞培养基1:200稀释储存液,配置工作液(终浓度150 μg/mL),即1× D-萤光素钾盐。
(3)去除培养细胞的培养基。
(4)向细胞内添加适量1×萤光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)。
2. 活体成像分析
(1)用无菌的1× PBS配制D-萤光素钾盐工作液(15 mg/mL),即向10 mg D-萤光素钾盐中,加入667 µL 1×PBS,0.2 µm滤膜过滤除菌。使用时,需保持冰冷且避光。
(2)参照下表,根据不同的注射方式,注射不同的体积。
(3)注射入体内5-10 min后,进行成像分析。
注意事项
注射方式
注射剂量
静脉注射(25-27 gauge针头)
按10 μL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL萤光素工作液
腹腔注射(25-27 gauge针头)
按10 μL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL萤光素工作液
肌肉注射(27 gauge针头)
50 μL,浓度为1–2 mg/mL萤光素工作液
鼻内注射(pipette)
50 μL,浓度为3 mg/mL萤光素工作液
1. D-Luciferin, Potassium Salt样品的背景荧光主要来源于萤光素,如果不立即使用本产品,建议分装后,-20℃避光保存。