产品概述：
产品货号：M7412S, M7412M, M7412L
产品规格：1 mL, 10% (v/v), 30-150 μm;5 mL,10% (v/v), 30-150μm; 100 mL, 10%(v/v), 30-150 μm
储存条件：2~8℃保存，有效期见外包装
产品介绍
本产品是由NHS活化的超顺磁性微球与Protein A共价结合形成的复合微粒。与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。本产品为微米级磁性微球，熟练操作可在15 min内完成抗体吸附过程，30 min内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用，适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。表1为磁珠基本信息。本品与不同抗体的亲和性比较参见附表1。
表1. Protein A琼脂糖磁珠基本信息
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产品名称 |
Protein A抗体纯化磁珠 |
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磁珠粒径 |
30~150 µm |
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磁珠浓度 |
10%（V/V） |
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配基 |
Protein A |
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介质 |
Magrose |
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抗体结合能力（mg Human IgG/mL Gel） |
25~30 |
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结合洗涤液 |
PBST(pH( 7.2~7.4): 137 mM NaCl,2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20) |
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洗脱液 |
100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 |
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中和液 |
1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 |
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保存液 |
PBST, 0.1% (V/V) Proclin 300 |
实验步骤
1.样品处理：取人血清100 µL至1.5 mL EP管中，接着加入900 µL结合洗涤液，充分混匀。
2.磁珠预处理：将抗体纯化磁珠漩涡振荡30 s，使磁珠充分重悬；取200 µL 10%（V/V）磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP管中。对磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液，用1 mL结合洗涤液洗涤2次，磁性分离，管中磁珠可直接用于抗体分离。
注：该步骤磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，当目标抗体的浓度大于150 µg/mL时，用户可取1.2~1.5倍磁珠用量（计算方式：如1.5×样品中目标抗体含量/磁珠最大结合量），若目标抗体浓度过低，如低于70 µg/mL时，客户为了提高抗体回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。
3. 抗体吸附：在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，促使样品和磁珠充分接触并吸附，翻转约15 min后进行磁性分离，移弃上清液。
4. 磁珠洗涤：向EP管中加入1 mL结合洗涤液，振荡重悬磁珠后进行磁性分离，移弃上清液；该操作重复3次。
5. 抗体洗脱：在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.5~1.0 mL洗脱液，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，翻转10 min后进行磁性分离，收集上清液至新的EP管。
注意事项：该步骤洗脱液用量，建议客户使最终洗脱的抗体浓度控制在0.6~1.2 mg/mL，此时第1次洗脱条件中95%以上的抗体将被洗脱下来；若洗脱液 用量过少，会导致部分抗体在第1次洗脱时仍然留在磁珠上，从而导致抗体回收率降低。
6. 抗体中和：在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的中和液，一般为抗体洗脱体积的1/10，最终使洗脱的抗体pH值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7. 磁珠后处理：使用后的磁珠用洗脱液洗涤2次，磁性分离，弃上清液；接着用结合洗涤液洗涤3次，磁性分离，弃上清液，加入200 µL保存液重悬磁珠，置于2~8℃保存。
8. 磁珠再生
（1）磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。
（2）按约每1 mL 10%（V/V）磁珠加入1 mL 1%（V/V）Triron X-100磁珠再生缓冲液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合，10 min后进行磁性分离，弃上清液。
（3）立即加入1 mL结合洗涤液 进行重悬，然后磁性分离，弃上清液，重复该操作3次。
（4）加入1 mL保存液 重悬磁珠，置于2~8℃保存。
注意事项
1.进行抗体纯化操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2.本产品须与磁性分离器配套使用。
3.磁珠使用前应充分振荡均匀。
4.磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
5.请勿将磁珠冷冻或离心，以免引起不可逆聚集。
附表1. Protein A与不同来源及类型的抗体亲和性比较
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物种 |
类型 |
Protein A结合 |
|
人 |
IgA |
可变 |
|
IgD |
- |
|
|
IgG1 |
++++ |
|
|
IgG2 |
++++ |
|
|
IgG3 |
- |
|
|
IgG4 |
++++ |
|
|
IgM |
可变 |
|
|
小鼠 |
IgG1 |
+ |
|
IgG2a |
++++ |
|
|
IgG2b |
+++ |
|
|
IgG3 |
++ |
|
|
IgM |
可变 |
|
|
大鼠 |
IgG1 |
- |
|
大鼠 奶牛 |
IgG2a |
- |
|
IgG2b |
- |
|
|
IgG3 |
- |
|
|
IgG |
++ |
|
|
山羊 |
IgG |
- |
|
绵羊 |
IgG |
- |
|
马 |
IgG |
++ |
|
兔 |
IgG |
++++ |
|
猪 |
IgG |
+++ |
|
豚鼠 |
IgG1 |
++++ |
|
豚鼠 仓鼠 |
IgG2 |
++++ |
|
IgG |
+ |
|
|
猕猴 |
IgG |
++++ |
|
禽卵黄 |
IgY |
- |
|
狗 |
IgG |
++ |
|
考拉 |
IgG |
- |
|
羊驼 |
IgG |
- |
注: “+”=结合能力弱，“+++”=结合能力中等，“+++++”=结合能力强，“-”=无法结合
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