（4）洗脱：向离心管中加入30~40μL超纯水、10 mM Tris-HCl或TE，用移液器反复吹打10次，使磁珠与溶液充分混匀

将反应管于室温静置3~5 min。再将离心管置于磁性分离器至溶液变澄清，将上清液转移至新的离心管中，可直接用于后续研究或者置于-20℃冰箱长期保存。

注：用户可根据实验需要调整洗脱液体积，但不低于20 μL。

2.右侧片段筛选

用于回收分子量小于筛分界限的核酸片段，在该操作流程中，随着磁珠悬液与样本比率的增大，大片段核酸的结合效率会逐渐降低，如图1右侧所示：

（1）一次结合：将50 μL样本加入到合适的离心管中（编号A），再根据图1加入特定体积的磁珠悬液，移液器吹打混匀10次或涡旋30 s，室温静置5 min；将离心管置于磁性分离器上至溶液变澄清，用移液器将上清转移至另一个新的离心管中（编号B），弃去磁珠。

注：样本量×比率=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×0.6=30 μL磁珠悬液。

（2）二次结合：在上述离心管B中加入指定量（见备注）的磁珠悬液，漩涡震荡混匀后于室温下静置5min；将离心管置于磁性分离器上至溶液变澄清，用移液器吸去上清。

注：样本量×(1.8-比率)=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×(1.8-0.6)=60 μL磁珠悬液。

（3）洗涤：保持离心管B于磁性分离器上，加入200 μL 80%乙醇，室温下静置30 s后，用移液器吸去上清；重复该步骤一次。

注：最后一次洗涤后应尽可能除尽洗涤液。

（4）干燥：保持离心管B于磁性分离器上，风干至磁珠表面无明显光泽。

注：该步骤应避免磁珠干燥过度而影响洗脱效率。

（5）洗脱：向离心管B中加入30~40μL超纯水、10 mM Tris-HCl或TE，用移液器反复吹打10次，使磁珠与溶液充分混匀，将反应管于室温静置3~5 min，再将离心管置于磁性分离器至溶液变澄清，将上清液转移至新的离心管中，可直接用于后续研究或者置于-20℃冰箱长期保存。

注：用户可以根据实验需要调整洗脱液体积，但不低于20 μL

3.两侧片段筛选

用于回收分子量处于特定范围的核酸片段，在该操作流程中，可通过调整磁珠悬液与样本比率在左右两侧的变化（左侧片段筛选比率总大于右侧片段筛选比率），来控制反应体系对某一范围内的核酸片段的回收。

（1）一次结合：将50 μL样本加入合适的离心管（编号A）中，再根据图1的右侧片段筛选比率加入特定体积的磁珠悬液，漩涡震荡混匀后于室温下静置5min；将离心管置于磁性分离器上至溶液变澄清，用移液器将上清转移至另一个新的离心管中（编号B），弃去磁珠。

注：样本量×右侧片段筛选比率=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×0.60=30 μL磁珠悬液。

（2）二次结合：根据图1的左侧片段筛选比率，在上述离心管B中加入特定量（见注）的磁珠悬液，漩涡震荡混匀后室温下静置5min；将离心管置于磁性分离器上至溶液澄清，用移液器吸去上清。

注：样本量×(左侧片段筛选比率-右侧片段筛选比率)=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×(0.80-0.60)=10μL磁珠悬液。

（3）洗涤：保持离心管B于磁性分离器上，加入200 μL 80%(v/v)乙醇，室温静置30 s后，用移液器吸去上清；重复该步骤一次。

注：最后一次洗涤后应尽可能除尽洗涤液。

（4）干燥：保持离心管B于磁性分离器上，风干至磁珠表面无明显光泽。

注：该步骤应避免磁珠干燥过度而影响洗脱效率。

（5）洗脱：向离心管B中加入30~40μL超纯水、10 mM Tris-HCl或TE，用移液器反复吹打10次，使磁珠与溶液充分混匀，将反应管于室温静置3~5 min，再将离心管置于磁性分离器至溶液变澄清，将上清液转移至新的离心管中，可直接用于后续研究或者置于-20℃冰箱长期保存。

注：用户可以根据实验需要调整洗脱液体积，但不低于20 μL。

图1. DNA片段筛选结果

注：图左为左侧片段筛选结果，图右为右侧片段筛选结果（样本溶在TE中）

注意事项

1.操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2.磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻、离心等操作。

3.建议使用质量好的移液器吸头和反应管，避免因粘附磁珠及溶液而造成损失。

4.从磁珠保存管中移取磁珠前应充分震荡重悬均匀。

5.磁珠洗脱前应彻底去除洗涤液，避免残留乙醇影响DNA洗脱效率。

6.请勿长时间干燥磁珠，以免引起不可逆的磁珠聚集以及降低核酸洗脱效率。

7.样品中含有其他盐离子、PEG等成分，会影响最终片段筛选大小。如按建议筛选比率，需是不含影响筛选成分的，例如溶解在超纯水、Tris、TE等。其他溶液，可根据具体情况进行筛选比率的调整。

8.本产品仅供研究使用。

表1.  筛选的核酸片段大小与磁珠加入量的比率