二．手动操作流程

1.客户自备物品

（1）异丙醇（分析纯）

（2）80%乙醇

（3）1.5 mL离心管：2个/样品

（4）单通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL

（5）漩涡振荡器

（6）垂直混合仪

（7）恒温金属浴或水浴锅(55℃)

（8）磁性分离器

2.操作步骤

（1）裂解：取一个新的1.5 mL离心管，加入200μL的抗凝血液样品（不足200μL时可用PBS或洗脱液补足），再分别加入10μL的蛋白酶K（检查是否已加入溶液A）和230μL的裂解液，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡10 s后，置于55℃条件下反应5 min。

（2）结合：加入320μL的异丙醇和20μL的磁珠悬液，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡10 min（或漩涡震荡10 s后置于垂直混合仪上反应10 min）。然后将离心管置于磁性分离器上放置2 min，用移液器移去上清液并取下离心管。

注意：此步骤的磁性分离时间应不少于2 min。

（3）洗涤

a.加入600μL洗涤液I（检查是否已加入异丙醇），以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡至少1 min，使磁珠充分重悬，再将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管。重复该步骤一次。

b.加入600μL 80%乙醇，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡至少1 min，使磁珠充分重悬，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管。重复该步骤一次。

注意：最后一步洗涤应尽量除尽洗涤液。

（4）干燥：保持离心管于磁性分离器上，于室温下静置10 min后，即磁珠表面无明显光泽，取下离心管。

注意：干燥过程中若发现反应管中有液体残留时，可用小量程移液器吸弃液体。

（5）洗脱：加入100~200μL洗脱液，涡旋震荡，或用移液器缓慢吹打磁珠，使磁珠充分重悬。然后于55℃条件下加热5 min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的1.5mL离心管中，此即为纯化得到的基因组DNA，可保存于-20℃。

三．自动化操作流程

可以适配市面上大部分品牌核酸提取仪，详细参数请联系我司技术支持或设备厂商技术支持。

注意事项

1.操作之前，请务必认真阅读本产品手册。

2.血液样品的质量对产物DNA的纯化量有较大影响，应避免反复冻融血液样品。

3.蛋白酶K干粉溶解后，可分装储存于-20℃，但应避免反复冻融。

4.应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。

5.磁珠取用前应充分重悬均匀。

6.磁珠干燥前，应使用移液器吸尽洗涤液。

7.应避免磁珠过度干燥，否则会严重降低核酸洗脱效率。

8.建议使用质量较好的离心管和移液器吸头，避免因粘附磁珠而造成损失。

9.在96孔板中进行磁性分离操作时，磁珠吸附时间可适当延长。

10. 使用前请检查各组分是否存在析出情况，如有析出，请将试剂瓶置于60℃水浴加热溶解后使用。