产品概述:
产品货号:M7421S, M7421M
产品规格:20 rxns, 100 rxns
储存条件:在2~8℃下保存,有效期见外包装
应用范围:用于病毒核酸的提取
产品组分
组分 |
组分含量 |
|
M7421S |
M7421M |
|
A.磁珠悬液 |
0.4 mL |
2mL |
B.裂解液 |
8 mL |
40mL |
C.洗涤液I(选配) |
7.2 mL(首次使用前加入4.8 mL异丙醇) |
36mL(首次使用前加入24 mL异丙醇) |
D.洗涤液II |
6 mL(首次使用前加入24 mL无水乙醇) |
25mL(首次使用前加入100 mL无水乙醇) |
E.洗脱液 |
2 mL |
10 mL |
F.蛋白酶K |
10mg(首次使用前请加入0.82 mL溶液A) |
50mg(首次使用前请加入4.1 mL溶液A) |
G.溶液A |
0.82mL |
4.1mL |
产品介绍
含有靶核酸的待分离样品经裂解后,利用磁珠与DNA/RNA分子特异性识别和高效结合,并利用磁性分离器或磁棒使磁珠吸附于管壁或磁棒套,通过洗涤、洗脱、纯化过程得到所需的DNA/RNA。
适用样本
新鲜或冷冻的血浆、血清、尿液、分泌液、病毒浓缩液、细胞培养液上清或无细胞体液。可立即进行提取,也可于2~8℃保存,保存期不超过24小时,长期保存需放置在-20℃。使用前请充分混合,防止样本不均一。
实验步骤
一.手动操作流程
1.首次使用前
(1)在洗涤液I中加入指定量(见瓶身标签)的无水异丙醇(分析纯),并于“□”内打上“√”,混匀后于室温下密闭保存。
(2)在洗涤液II中加入指定量(见瓶身标签)的无水乙醇(分析纯),并于“□”内打上“√”,混匀后于室温下密闭保存。
(3)在蛋白酶K中加入指定量(见管身标签)的溶液A,并于“□”内打上“√”,混匀后保存于2~8℃,或分装后保存于-20℃。
2.客户自备物品
(1)1.5 mL离心管:2个/样品(DNase/RNase-free)
(2)单通道移液器:2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL(DNase/RNase-free)
(3)漩涡振荡器
(4)恒温金属浴(或水浴锅):55℃
(5)磁性分离器
(6)异丙醇,分析纯级别
(7)无水乙醇,分析纯级别
3.操作步骤
(1)裂解与结合:取一个新的1.5 mL离心管,加入200μL样本,再依次加入40μL蛋白酶K(检查是否已加入溶液A),400μL裂解液,200μL异丙醇和20μL磁珠悬液,调整合适的转速漩涡振荡混合均匀,并将离心管置于55℃加热15 min(每隔5 min颠倒数次)。然后将离心管置于磁性分离器上静置1 min,用移液器吸去上清液。
(2)洗涤
a.加入600μL洗涤液I(检查是否已加入异丙醇),用移液器缓慢吹打磁珠10次或漩涡震荡10 s,使磁珠充分重悬,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管。
b.加入600μL洗涤液II(检查是否已加入无水乙醇),用移液器缓慢吹打磁珠10次或漩涡震荡10 s,使磁珠充分重悬,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管。
c.重复上述步骤b一次。
注:步骤c应尽量除尽洗涤液。
(3)干燥:保持离心管于磁性分离器上,将其置于超净工作台中风干至磁珠表面无明显光泽(2-4 min)。
(4)洗脱:加入20~100μL洗脱液,用移液器缓慢吹打磁珠50次或漩涡震荡1 min,使磁珠充分重悬,于55℃加热5 min后,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,转移上清液至新的离心管中,此即为纯化得到的病毒基因组,可保存于-20℃。
二.自动化操作流程
可以适配市面上大部分品牌核酸提取仪,详细参数请联系我司技术支持或设备厂商技术支持。
注意事项
1. 操作之前,请务必认真阅读本产品说明书及操作指南。
2. 蛋白酶K干粉溶解后,可分装储存于-20℃,但应避免反复冻融。
3. 避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
4. 磁珠取用前应充分重悬均匀。
5. 磁珠干燥前,应用移液器吸尽洗涤液。
6. 干燥过程中避免磁珠过度干燥,否则会严重降低核酸洗脱效率。
7. 建议使用质量较好的离心管和移液器吸头,避免因粘附磁珠而造成损失。
8. 在96孔板中进行磁性分离操作时,磁珠吸附时间可适当延长。
9. 使用前请检查各组分是否存在析出情况,如有析出,请将试剂瓶置于60℃水浴加热溶解后使用。