产品概述:
产品货号:M7425S, M7425M
产品规格:20 rxns, 100 rxns
储存条件:2~8℃保存,可在常温下短时间储存,有效期见外包装
应用范围:各种唾液、拭子保存液等液体样品的基因组提取
产品组分
组分 |
组分含量 |
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M7425S |
M7425M |
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A.磁珠悬液 |
1 mL |
5 mL |
B.裂解液 |
4 mL |
20 mL |
C.洗涤液I |
24 mL(首次使用前请加入24 mL无水乙醇) |
120 mL(首次使用前请加入120 mL无水乙醇) |
D.洗涤液II |
6 mL(首次使用前请加入14 mL无水乙醇) |
30 mL(首次使用前请加入70 mL无水乙醇) |
E.洗脱液 |
4 mL |
20 mL |
F.蛋白酶K |
4 mg(首次使用前请加入0.4 mL溶液A) |
20 mg(首次使用前请加入2 mL溶液A) |
G.溶液A |
0.4 mL |
2 mL |
产品介绍
本产品使用超顺磁性微球可以特异性的从唾液内吸附DNA,通过洗涤去除DNA以外的蛋白质等杂质。洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,分离纯化得到高质量核酸。
适用仪器
本试剂盒适用于TIANGEN TGuide S32, TIANLONG NP968-C,Thermo KingFisher Flex24等大体积自动化核酸提取仪,也适用于手动提取。
实验步骤
一. 手动操作流程
1. 客户自备物品
(1)异丙醇(分析纯)
(2)无水乙醇(分析纯)
(3)1.5 mL离心管、2 mL离心管:2个/样品
(4)单通道移液器:200 μL、1000 μL
(5)漩涡振荡器
(6)垂直混合仪
(7)恒温金属浴或水浴锅
(8)磁性分离器
2.操作步骤(以400 μL样本量为例)
(1)唾液样本裂解
a.向1.5 mL离心管中加入400 μL唾液样本(若样本体积不足400 μL,请加入唾液保存液补齐至400 μL)、20μL蛋白酶K溶液、以及200 μL裂解液,涡旋混匀。
注意:裂解液低温情况下可能出现沉淀,可于37℃加热2 min融化。
b.将离心管与55℃温浴10 min,期间每隔5 min摇晃混均一次,完毕后低速瞬离使管盖以及管壁上液体集中到官底,待用。
(2)结合:向上述离心管中加入350 μL异丙醇,再加入50 μL磁珠悬液,涡旋震荡3 min混匀后静置2 min。
(3)磁性分离:将离心管置于磁力架上静置20 s至磁珠吸附完全;如果离心管内盖有磁珠,可保持EP管在磁力架上,整体上下颠倒2-3次至磁珠完全吸附。保持EP管固定于磁力架上,用移液枪吸弃上清液,期间避免接触磁珠。
(4)洗涤1:向1.5mL离心管中加入800 μL洗涤液I,将1.5mL离心管从磁力架上取下,用移液枪吹散磁珠,涡旋震荡2 min,磁性分离(参照步骤3)操作),再重复此操作1次。
(5)洗涤2:使用800 μL洗涤液II,(参照步骤(4)操作)。
(6)干燥:保持离心管于磁性分离器上,于是室温下开盖静置10 min后,取下离心管。
注意:干燥过程中若发现反应管中有液体残留时,可用小量程移液器吸弃液体。
7)洗脱:加入100 μL洗脱液 ,涡旋震荡1 min或用移液器缓慢 吹打磁珠50次,使磁珠充分悬浮,于65℃加热10 min后,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,转移上清液至新的1.5 mL离心管中,此即为纯化得到的唾液DNA,可保存于-20℃。
二、自动化操作流程
可以适配市面上大部分品牌核酸提取仪,详细参数请联系我司技术支持或设备厂商技术支持。
注意事项
1.操作之前,请务必认真阅读本产品手册。
2.唾液样品的质量对产物DNA的纯化量有较大影响,应避免反复冻融唾液样品。
3.蛋白酶K干粉溶解后,可分装储存于-20℃,但应避免反复冻融。
4.应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
5.磁珠取用前应充分重悬均匀。
6.磁珠干燥前,应使用移液器吸尽洗涤液。
7.应避免磁珠过度干燥,否则会严重降低核酸洗脱效率。
8.建议使用质量较好的离心管和移液器吸头,避免因粘附磁珠而造成损失。
9.在96孔板中进行磁性分离操作时,磁珠吸附时间可适当延长。
10.使用前请检查各组分是否存在析出情况,如有析出,请将试剂瓶置于60℃水浴加热溶解后使用。