产品概述：
产品货号：M7427S, M7427M
产品规格：5 rxns, 50 rxns
储存条件：2~35℃保存，有效期见外包装
应用范围：适用于生活污水、医疗机构污水中的细菌、病毒的核酸提取
产品组分
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组分 |
组分含量 |
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M7427S |
M7427M |
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A.裂解液 |
10 mL |
100 mL |
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B.结合液 |
10 mL |
100 mL |
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C.磁珠悬液 |
0.1mL |
1 mL |
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D.洗涤液A |
15 mL |
150 mL |
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E.洗涤液B |
7.5 mL（首次使用加入7.5 mL异丙醇） |
75 mL（首次使用加入75 mL异丙醇） |
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F.洗涤液C |
4 mL（首次使用加入16 mL无水乙醇） |
40 mL（首次使用加入160 mL无水乙醇） |
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G.洗脱液 |
0.5 mL |
5 mL |
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H.蛋白酶K |
5 mg |
50 mg |
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I.溶液A |
0.5 mL |
5 mL |
产品介绍
本产品使用超顺磁性微球可以特异性的吸附核酸，通过洗涤去除蛋白质、盐类等杂质，洗脱液解离吸附在磁珠上的核酸，分离纯化得到高质量核酸。
适用于生活污水、医疗机构污水中的细菌、病毒的核酸提取。本产品既可手动提取，也适用于自动化核酸提取仪进行高通量全自动提取。提取的产物可用于各种分子生物学常规实验。
适用仪器
本试剂盒适用于Thermo KingFisher Flex24等大体积自动化核酸提取仪，也适用于手动提取。
样本要求
1.适用于生活污水、医疗机构污水、铝盐混凝沉淀法富集得到的污水病毒浓缩液上清。
2.污水样本预离心：取50 mL的污水样本在4℃、2500 g条件下离心30 min，留取上清液备用，剩余污水样本作为备份。
注：当污水样本悬浮物含量过高，可能影响核酸提取和实时荧光RT-PCR检测时，应采用预离心弃除悬浮物后再进行后续操
作；提取污水中的细菌核酸不可预离心。
实验步骤
一．首次使用前
1.在洗涤液B中加入瓶身标签指定量的异丙醇（分析纯），并于“□”内打上“√”，混匀。在洗涤液C中加入瓶身标签指定量的无水乙醇（分析纯），并于“□”内打上“√”，混匀。
2.在蛋白酶K中加入瓶身标签指定量的溶液A，并于“□”内打上“√”，混匀后保存于-20℃
二．手动操作流程（1mL样本为例，其它样本体积参考表1）
1.客户自备物品
（1）异丙醇（分析纯）
（2）15 mL离心管、1.5 mL离心管（DNase-free、RNase-free）
（3）单通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL、5000 μL
（4）漩涡振荡器
（5）垂直混匀仪
（6）水浴锅或金属浴
（7）磁性分离器：可选用磁性分离器，货号：M7429
注：每次使用前，试剂盒需平衡至室温。
2.实验操作
（1）准备裂解液：裂解液65℃水浴5~10 min至试剂沉淀完全溶解。
（2）裂解：取15mL离心管加入1 mL污水样本（或200 μL铝盐混凝沉淀法富集得到的污水病毒浓缩液上清与800 μL纯化水），然后加入2 mL裂解液，再加入100 μL蛋白酶K（检查是否已加入溶液A），调整合适的转速涡旋振荡1 min，使其充分混合，再将离心管置于65℃加热10 min，间隔5min涡旋振荡30s。
（3）结合：在上述15mL离心管中加入2 mL结合液，2 mL异丙醇（自备），20 μL磁珠悬液，室温垂直混匀10min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
（4）洗涤
a.加入0.8 mL洗涤液A，使用移液器吸取管内液体吹打管壁磁珠至管底并混匀，把管内的磁珠悬液转移至1.5 mL离心管中，涡旋振荡1 min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
b.加入0.8 mL洗涤液B（检查是否已加入异丙醇），涡旋振荡1 min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
c.加入0.8 mL洗涤液C（检查是否已加入无水乙醇），涡旋振荡1 min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
d.加入0.8 mL洗涤液C，涡旋振荡1 min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并保持离心管于磁力架上。
注：步骤d应尽量除尽管内残留的液滴。
（5）干燥：保持离心管开盖置于磁力架上，室温放置3~10min至表面无明显液体光泽。
（6）洗脱：加入20~100 μL洗脱液，涡旋振荡1 min使磁珠充分混匀，于65℃加热3min后再涡旋振荡1 min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的1.5 mL离心管中，此即为纯化得到的核酸。
表1. 提取1~5 mL样本量对应使用的试剂
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样本体积 容器与试剂 |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
5 mL |
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离心管类型 |
15 mL离心管 |
50 mL离心管 |
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裂解液 |
2 mL |
4 mL |
6 mL |
8 mL |
10 mL |
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蛋白酶K |
100 μL |
200 μL |
300 μL |
400 μL |
500 μL |
|
结合液 |
2 mL |
4 mL |
6 mL |
8 mL |
10 mL |
|
异丙醇（自备） |
2 mL |
4 mL |
6 mL |
8 mL |
10 mL |
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磁珠悬液 |
20 μL |
40 μL |
60 μL |
80 μL |
100 μL |
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洗涤液A |
0.8 mL |
0.8 mL |
1 mL |
1 mL |
1 mL |
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洗涤液B |
0.8 mL |
0.8 mL |
1 mL |
1 mL |
1 mL |
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洗涤液C |
0.8+0.8 mL |
0.8+0.8 mL |
1+1 mL |
1+1 mL |
1+1 mL |
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洗脱液 |
20~100 μL |
30~100 μL |
40~100 μL |
50~150 μL |
60~150 μL |
注：本产品的洗脱效率与洗脱液体积有关，洗脱液体积越大，洗脱的核酸总量越多，但浓度越低。
二、自动化操作流程
根据不同型号自动化核酸提取仪而定，详情请咨询技术支持。
注意事项
1. 试剂盒提前30 min从冰箱取出后平衡至室温。裂解液试剂瓶提前10 min放入水浴锅中65℃预热溶解后混匀。
2. 检查耗材并标记板号；检查所有深孔板底是否有损坏或裂缝；检查磁棒套是否有高低不平或歪斜。检查完毕后把磁棒套放入深孔板内，在磁棒套板的每个孔上方轻轻均匀按压使磁棒套复位。
3. 确认仪器状态正常及程序正常（用户可根据实际使用情况自行调整提取程序参数，如磁吸时间、干燥时间、洗脱体积等）。
4.加入试剂与样本。移液枪插入孔底后把洗脱液加在中间凹陷位置，请勿加在两侧位置。本产品自动操作洗脱体积可低至50 μL，但需注意洗脱效率与洗脱液体积有关，洗脱液体积越大，洗脱效率越高，洗脱的核酸总量越多，但浓度越低。
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