产品概述：

产品货号：MAG-MS-GDNA-50，MAG-MS-GDNA-250

产品规格：50 rxns、250 rxns

运输条件：常温运输

保存条件：PK Soln 2-8℃保存12个月，-20℃长期保存，其它组分室温保存12个月。

应用范围：抗凝全血或血液白膜层、唾液、含保存液拭子、干拭子/棉签、干血斑、动物组织、培养 细胞、FFPE、指甲或头发、革兰氏阴性菌。

产品组分

*注：

1）若使用前Buffer ATL有沉淀，需在56℃下温育溶解后使用；

2）Buffer DW2为浓缩溶液，使用前请按照瓶身标签提示加入无水乙醇进行稀释。

产品介绍

本制品适用于从多种类型样本中提取DNA，如：全血或血液白膜层、唾液、含保存液拭子、干拭子/棉签、干血斑、动物组织、培养细胞、FFPE等样本。试剂盒采用了磁性纳米颗粒固相核酸富集技术，精选高性能纳米磁珠，配合精心研制的Buffer体系组合而成。提取所得的DNA产物可直接用于PCR、qPCR、芯片分析、NGS等各种下游分子生物学实验。

适用仪器

适用于基于磁转移技术的32位或96位核酸提取仪。如BIO-DL 32，TIANGEN TGuide S32，TIANLONG NP968-C，Rosetta 96等自动化核酸提取仪，也适用于手动提取。

操作步骤

一．首次使用前：

1.样本前处理步骤，若使用水浴锅进行裂解，期间需将内容物颠倒混匀2~3次；若使用恒温振荡器裂解，建议设置振荡速度为1000~1500 rpm；

2. Buffer DW2使用前需按照试剂瓶标签提示加入无水乙醇进行稀释后使用；

3.建议使用Buffer DW1清洗2次，可改善所得DNA纯度。

4.自备试剂：异丙醇（AR）、无水乙醇（AR）

二．样本前处理

A.   抗凝全血或血液白膜层

1.   向2 mL离心管中加入25 μL PK Soln。

2.   加入250 μL抗凝全血样本至上述离心管。

注：禽类抗凝血液，取10~15 μL并加入去离子水补足至250 μL，再进行下一步实验。

3.   加入250 μL Buffer AL，高速涡旋10秒，于70℃振荡温浴15分钟。短暂离心后 冷却至室温。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

B.   新鲜唾液、含保存液的唾液或含保存液拭子

1.   向2 mL离心管中加入25 μLPK Soln。

2.   加入300μL新鲜唾液样本（或唾液/保存液混合液、充分涡旋的拭子/保存液混合液 样本）至上述离心管。

3.   加入300μL Buffer AL，高速涡旋10秒，于70℃振荡温浴15分钟。短暂离心后 冷却至室温。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

C.   干拭子/棉签样本

1.   转移采集完细胞的干拭子（或棉签）至2 mL离心管中，加入25 μLPK Soln。

2.   加入400 μL Buffer ATL，高速涡旋10秒，于58℃振荡温浴30分钟。

3.   加入400 μL Buffer AL，涡旋混匀，于70℃振荡温浴10分钟，10,000×g离心1分钟后，吸取600 μL上清液转移至新的2 mL离心管中。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

D.   干血斑（DBS）

1.   转移3~10片3×3 mm尺寸的干血斑（或1~4片6×6 mm尺寸的干血斑）至2 mL离心管中，加入25 μL PK Soln。

2.   加入400 μL Buffer ATL，高速涡旋10秒，于58℃振荡温浴30~60分钟。

注：剧烈振荡对干血斑样本中DNA释放是有利的，建议在1,500 rpm下进行操作，陈旧血卡、动物血卡、过量血卡可适当延长裂解时间。

3.   加入400 μL Buffer AL，涡旋混匀，于70℃振荡温浴10~15分钟。10,000×g离心1分钟后，吸取600 μL上清液转移至新的2 mL离心管中。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

E.    动物组织

1.   转移小于30 mg动物组织至2 mL离心管中，加入25 μL PK Soln。

2.   加入300μL Buffer ATL，高速涡旋10秒。58℃振荡温浴30~60分钟或延长时间至完全消化样本。（如果需要去除RNA，加入2~4 µL RNaseA（100 mg/mL）室温放置10分钟以降解RNA）。

注1：对于不易消化的组织样本，可延长消化时间至消化完全；若存在长时间未能消化完全的物质，可10,000×g离心1分钟，然后转移上清液至新的2 mL离心管中。

注2：对于骨头和牙齿，需要先液氮研磨成粉末，取100 mg粉末进行实验，需延长消化时间。

3.   加入300μL Buffer AL，涡旋10秒混合均匀。

注：对于不易裂解的组织样本且希望获得更好的DNA质量，需继续在70℃下裂解10分钟；对于组织量少且较易裂解的组织样本，无需该70℃裂解步骤。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

F.   培养细胞

1.   取一定量的细胞样本（<5×106 cells）置于2 mL离心管中，1,000×g离心5分钟收集细胞，小心弃去上清液。

2.   加入25 μL PK Soln和300μL PBS缓冲液，涡旋打散细胞。

3.   加入300μL Buffer AL，涡旋10秒，于70℃振荡温浴15分钟。短暂离心后，冷却至室温。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

G.    FFPE

1.   将2~8张石蜡切片（厚度5~10 μm）转入2 mL离心管中，用二甲苯或代替物脱除石蜡，然后用无水乙醇清洗干净，烘干。

2.   加入25 μL PK Soln和300μL Buffer ATL，高速涡旋10秒，于58℃振荡温浴30~60分钟或至样本完全裂解。

3.   将离心管置于90℃下温浴60分钟（此步骤无需振荡）。短暂离心后冷却至室温。

4.   向离心管中加入300μL Buffer AL、350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

H.    指甲、头发和羽毛

1.   转移10~25 mg指甲、头发或羽毛样本至2 mL离心管中。

注：指甲样本尽量剪成小片；头发样本从发根部剪下0.5~1 cm数根；羽毛样本剪下1~5 cm长并剪短；精斑样本取＜0.5 cm2；精液样本吸取100 μL。

2.   加入25 μL PK Soln、20 μL 1M DTT和300μL Buffer ATL，高速涡旋10秒后，于58℃振荡温浴30~60分钟或延长时间至完全消化样本。

注：对于毛发样本，通常1小时即可达到基本消化；对于指甲样本，无需等待指甲完全消化，通常1~6小时后即可吸取消化液进行下一步实验；精斑&精液样本至少消化1小时。

3.   加入300μL Buffer AL，涡旋10秒。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix ，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

I.    革兰氏阴性菌

1.   取一定量的细菌培养液1~5 mL（<2×109 cells）10,000×g离心1分钟，小心弃去上清液。

2.   加入25 μL PK Soln和300μL Buffer ATL至上述离心管。涡旋10秒后，于58℃振荡温浴30分钟。

3.   加入300 μL Buffer AL，涡旋10秒。

注：对于大量细菌，可继续在70℃下裂解10分钟；对于少量细菌，则无需该70℃裂解步骤。

4.   向离心管中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix，涡旋振荡5~10分钟。按【纯化步骤】继续进行后续操作。

三．纯化步骤:手动法

5.   短暂离心，将离心管内液体收集至底部，然后将离心管置于磁力架上静置30秒。

待磁珠完全吸附后，用移液器吸弃管内液体。

6.   向离心管中加入700 μL Buffer DW1，1,000 rpm涡旋振荡2~3分钟，磁性分离，吸弃上清液。

注：如对核酸产物纯度要求较高，该步清洗方案可变更为使用500 μL Buffer DW1清洗2次，可获得更优的A260/280和A260/230数值。

7.   向离心管中加入700 μL Buffer DW2（已用乙醇稀释），1,000 rpm涡旋振荡2~3分钟，磁性分离，吸弃上清液。

8.   重复上述步骤7一次。

9.   将离心管继续保持在磁力架上，放入45~50℃烘箱中，干燥约10分钟至无明显乙醇气味（也可室温晾干，但需要更长时间）。

10.  挥发除醇结束后，向离心管中加入50~100 μL Buffer EB，吹散或振散磁珠，58℃振荡温浴5~10分钟。磁性分离，将洗脱液转移至另一干净离心管中，得DNA产物，保存于-20℃。

四．纯化步骤: 96位核酸提取仪

1.    将Sample Plate中加入350 μL异丙醇和15 μL MB Mix（可预先混合）；

2.    在Sample Plate中加入相应体积的不同样本的裂解上清液；

3.    将96位磁棒套放入到Wash 3 Plate中（必须准确放入，否则可能损坏磁棒套。此步骤为针对King Fisher Flex，若使用其它品牌仪器请做相应调整）。

4.    将试剂板按对应顺序放入核酸提取仪中，运行程序。

5.    程序运行完毕，转移Elute Plate中DNA至新离心管中，提取过程结束。

注：长时间保存建议将DNA产物保存于-20℃环境。

说明书：

 UE-MAG-MS-GDNA-50，MAG-MS-GDNA-250