产品概述:
本试剂盒适合从琼脂糖凝胶中回收DNA(70 bp-10 kb),回收量多至8 μg,回收率为60~85%,琼脂糖凝胶在温和的缓冲液中熔化,其中保护剂能防止线状DNA在高温下降解,然后在结合缓冲液作用下使DNA选择性的结合到膜上。纯化的DNA纯度高,并保持片段完整性和高生物活性,可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
同时本试剂盒可以直接用于PCR产物、酶促反应、测序反应的反应液中提取DNA(大于75 bp),提取多至8 μg,回收率为70~90%,纯化的DNA不含引物、酶蛋白及单核苷酸。
一、 试剂盒组成、贮存、稳定性
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Cat. No. |
UE-GX/PCR-10 |
UE-GX/PCR-50 |
UE-GX/PCR-250 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
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Miniprep column C15 |
10 |
50 |
250 |
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2 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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1.5 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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Buffer A |
6 ml |
28 ml |
145 ml |
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Buffer DE-A |
12 ml |
50 ml |
230 ml |
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Buffer PCR-B |
12 ml |
50 ml |
230 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
2×72 ml |
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Eluent |
1 ml |
5 ml |
25 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
Buffer A:制备管活化处理液,室温密闭贮存。
Buffer DE-A:凝胶熔化剂,含 DNA 保护剂,防止 DNA在高温下降解。室温密闭贮存。
Buffer PCR-B:结合液(促使大于 70 bp 的 DNA 片段选择性结合到 DNA制备膜上)。室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate:去盐液,使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(用100%乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。
Eluent:洗脱液,室温密闭贮存。
二、注意事项
1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer PCR-B 含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
2. 在凝胶回收步骤2中,将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间(线型 DNA长时间暴露在高温条件下易于水解),从而提高回收率。勿将含 DNA 的凝胶时间地暴露在紫外灯下,减少紫外线对 DNA造成的损伤。
3. 在凝胶回收步骤3中,凝胶必须完全熔化,否则将严重影响 DNA 回收率。
4. 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测pH值,如果pH大于7.5,可向含有DNA的胶溶液中加3M 醋酸钠调节pH至4-6之间。
5. 将 Eluent 或去离子水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。
6. DNA分子呈酸性,建议在 2.5 mM Tris-HCl,pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。
7. 回收率低建议:
1)混合液转移至吸附柱可以放置2-5 min;
2)混合液过柱离心之后将滤液再次重复离心;
3)加热洗脱液温度;
4)洗脱液二次重复洗脱。
三、实验准备
1. 第一次使用前,Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3. 准备75°C水浴。







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